Logo do repositório
 
Publicação

Characterization of extracellular vesicles from ascitic fluid in ovarian cancer patients

2022-02Dissertação de mestrado Acesso aberto
Ver registo simples
datacite.subject.fosEngenharia e Tecnologia::Engenharia Químicapt_PT
dc.contributor.advisorIsidro, Inês
dc.contributor.authorRodrigues, Leandra José Silva
dc.date.accessioned2022-05-26T18:08:10Z
dc.date.available2022-05-26T18:08:10Z
dc.date.issued2022-02
dc.description.abstractOvarian cancer is the first cause of death among gynaecological malignancies in women. Most patients are diagnosed at late stages and present ascites, the accumulation of ascitic fluid in the perito- neal cavity, associated to metastasis and poor prognosis. Ascitic fluids are enriched in pro-tumorigenic components, such as extracellular vesicles (EVs) involved in the tumour microenvironment intercellular crosstalk. Despite metabolic alterations being a hallmark of cancer and highly correlated with sensitivity to treatment, the metabolite cargo is still the least explored component of EVs in ovarian cancer. The aim of this thesis was to characterize the metabolic signature of EVs isolated from ascitic fluids in ovarian cancer patients. Methods for the characterization of EVs were first implemented using EVs isolated from an ovarian cancer cell line (ES-2), namely for the presence of EV and non-EV com- ponents by Western blot, as well as the analytical platform for metabolomics and lipidomics by LC- MS. Ultimately, EVs were isolated using differential centrifugation from ovarian cancer biofluids, in- cluding ascitic fluids and peritoneal washes as controls. Isolated and discarded fractions were charac- terized by Western blot; by transmission electron microscopy (TEM) for morphology, and by nanopar- ticle tracking analysis (NTA) for particle concentration and size, following the International Society for Extracellular Vesicles (ISEV) guidelines. We demonstrated the recovery of EVs and increasing purity of isolates and confirmed the pres- ence of EVs on biofluids. The metabolic characterization of ES-2 EVs suggested an enrichment in metabolic pathways involved in cancer processes. This methodology for characterization of the meta- bolic content of EVs can be further applied in EVs from ascitic fluids and peritoneal washes, which may elucidate the role of EVs as mediators of metabolic crosstalk in ovarian cancer tumour microenvi- ronment and eventually uncover potential biomarkers for ovarian cancer prognosis.pt_PT
dc.description.abstractO cancro do ovário é a principal causa de morte por doenças ginecológicas em mulheres. Geral- mente o diagnóstico é tardio e acompanhado por ascites, a acumulação de fluído ascítico na cavidade peritoneal associada a processos metastáticos e mau prognóstico. Os fluídos ascíticos são constituídos por componentes pró-tumorigénicos, como vesículas extracelulares (EVs) envolvidas no crosstalk in- tercelular estabelecido em microambientes tumorais. Alterações metabólicas são um marcador de can- cro e estão relacionadas com a sensibilidade ao tratamento. Contudo, o conteúdo metabólico dos EVs é ainda o menos estudado no contexto de cancro do ovário. O objetivo desta tese foi caraterizar o perfil metabólico de EVs isolados de fluídos ascíticos em pacientes de cancro do ovário. Métodos para caraterização de EVs foram primeiro implementados usando EVs de uma linha celular (ES-2), nomeadamente para a deteção de componentes e contaminan- tes de EVs por Western blot e para a análise de metabolómica/lipidómica por LC-MS. Por fim, EVs de fluídos biológicos, incluindo fluídos ascíticos e lavados peritoneais (controlos), foram isolados por cen- trifugação diferencial. Frações isoladas e descartadas foram caraterizadas por Western blot, por micros- copia eletrónica de transmissão (TEM) para análise morfológica das partículas e por nanoparticle tracking analysis (NTA) para determinação da concentração e tamanho, seguindo as diretrizes da Inter- national Society for Extracellular Vesicles. Foi demonstrada a recuperação de EVs no final do isolamento, o aumento de pureza das frações isoladas e a presença de EVs em fluídos biológicos. A caraterização dos EVs de ES-2 sugeriu o enri- quecimento em vias metabólicas envolvidas em processos tumorais. Esta metodologia para carateriza- ção do conteúdo metabólico pode futuramente ser aplicada em EVs de fluídos ascíticos e lavados peri- toneais para elucidar o papel dos EVs como mediadores do crosstalk metabólico no microambiente tumoral e eventualmente revelar potenciais biomarcadores para o prognóstico de cancro do ovário.pt_PT
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10362/138716
dc.language.isoengpt_PT
dc.relationiNOVA4Health - Programme in Translational Medicine (iBET, CEDOC/FCM, IPOLFG e ITQB)
dc.relationiNOVA4Health - Programme in Translational Medicine (iBET, CEDOC/FCM, IPOLFG e ITQB)
dc.subjectovarian cancerpt_PT
dc.subjectascitic fluidspt_PT
dc.subjectmetabolic crosstalkpt_PT
dc.subjectextracellular vesiclespt_PT
dc.subjectdifferential centrifugationpt_PT
dc.subjectmetabolomicspt_PT
dc.titleCharacterization of extracellular vesicles from ascitic fluid in ovarian cancer patientspt_PT
dc.typemaster thesis
dspace.entity.typePublication
oaire.awardNumberUIDB/04462/2020
oaire.awardNumberUIDP/04462/2020
oaire.awardTitleiNOVA4Health - Programme in Translational Medicine (iBET, CEDOC/FCM, IPOLFG e ITQB)
oaire.awardTitleiNOVA4Health - Programme in Translational Medicine (iBET, CEDOC/FCM, IPOLFG e ITQB)
oaire.awardURIinfo:eu-repo/grantAgreement/FCT/6817 - DCRRNI ID/UIDB%2F04462%2F2020/PT
oaire.awardURIinfo:eu-repo/grantAgreement/FCT/6817 - DCRRNI ID/UIDP%2F04462%2F2020/PT
oaire.fundingStream6817 - DCRRNI ID
oaire.fundingStream6817 - DCRRNI ID
project.funder.identifierhttp://doi.org/10.13039/501100001871
project.funder.identifierhttp://doi.org/10.13039/501100001871
project.funder.nameFundação para a Ciência e a Tecnologia
project.funder.nameFundação para a Ciência e a Tecnologia
rcaap.rightsopenAccesspt_PT
rcaap.typemasterThesispt_PT
relation.isProjectOfPublication5974b624-6f0c-4e2e-a527-c96f9e4a69a8
relation.isProjectOfPublicationd9074f46-a47d-4907-8f8c-0460a19a39a1
relation.isProjectOfPublication.latestForDiscoveryd9074f46-a47d-4907-8f8c-0460a19a39a1
thesis.degree.nameMESTRADO EM BIOTECNOLOGIApt_PT

Ficheiros

Principais
A mostrar 1 - 1 de 1
Miniatura
Nome:
Rodrigues_2022.pdf
Tamanho:
6.78 MB
Formato:
Adobe Portable Document Format
Ver/Abrir

Coleções

FCT: DQ - Dissertações de Mestrado