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Publicação
Characterization of extracellular vesicles from ascitic fluid in ovarian cancer patients
| Nome: | Descrição: | Tamanho: | Formato: | |
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Autores
Orientador(es)
Resumo(s)
Ovarian cancer is the first cause of death among gynaecological malignancies in women. Most
patients are diagnosed at late stages and present ascites, the accumulation of ascitic fluid in the perito-
neal cavity, associated to metastasis and poor prognosis. Ascitic fluids are enriched in pro-tumorigenic
components, such as extracellular vesicles (EVs) involved in the tumour microenvironment intercellular
crosstalk. Despite metabolic alterations being a hallmark of cancer and highly correlated with sensitivity
to treatment, the metabolite cargo is still the least explored component of EVs in ovarian cancer.
The aim of this thesis was to characterize the metabolic signature of EVs isolated from ascitic
fluids in ovarian cancer patients. Methods for the characterization of EVs were first implemented using
EVs isolated from an ovarian cancer cell line (ES-2), namely for the presence of EV and non-EV com-
ponents by Western blot, as well as the analytical platform for metabolomics and lipidomics by LC-
MS. Ultimately, EVs were isolated using differential centrifugation from ovarian cancer biofluids, in-
cluding ascitic fluids and peritoneal washes as controls. Isolated and discarded fractions were charac-
terized by Western blot; by transmission electron microscopy (TEM) for morphology, and by nanopar-
ticle tracking analysis (NTA) for particle concentration and size, following the International Society for
Extracellular Vesicles (ISEV) guidelines.
We demonstrated the recovery of EVs and increasing purity of isolates and confirmed the pres-
ence of EVs on biofluids. The metabolic characterization of ES-2 EVs suggested an enrichment in
metabolic pathways involved in cancer processes. This methodology for characterization of the meta-
bolic content of EVs can be further applied in EVs from ascitic fluids and peritoneal washes, which
may elucidate the role of EVs as mediators of metabolic crosstalk in ovarian cancer tumour microenvi-
ronment and eventually uncover potential biomarkers for ovarian cancer prognosis.
O cancro do ovário é a principal causa de morte por doenças ginecológicas em mulheres. Geral- mente o diagnóstico é tardio e acompanhado por ascites, a acumulação de fluído ascítico na cavidade peritoneal associada a processos metastáticos e mau prognóstico. Os fluídos ascíticos são constituídos por componentes pró-tumorigénicos, como vesículas extracelulares (EVs) envolvidas no crosstalk in- tercelular estabelecido em microambientes tumorais. Alterações metabólicas são um marcador de can- cro e estão relacionadas com a sensibilidade ao tratamento. Contudo, o conteúdo metabólico dos EVs é ainda o menos estudado no contexto de cancro do ovário. O objetivo desta tese foi caraterizar o perfil metabólico de EVs isolados de fluídos ascíticos em pacientes de cancro do ovário. Métodos para caraterização de EVs foram primeiro implementados usando EVs de uma linha celular (ES-2), nomeadamente para a deteção de componentes e contaminan- tes de EVs por Western blot e para a análise de metabolómica/lipidómica por LC-MS. Por fim, EVs de fluídos biológicos, incluindo fluídos ascíticos e lavados peritoneais (controlos), foram isolados por cen- trifugação diferencial. Frações isoladas e descartadas foram caraterizadas por Western blot, por micros- copia eletrónica de transmissão (TEM) para análise morfológica das partículas e por nanoparticle tracking analysis (NTA) para determinação da concentração e tamanho, seguindo as diretrizes da Inter- national Society for Extracellular Vesicles. Foi demonstrada a recuperação de EVs no final do isolamento, o aumento de pureza das frações isoladas e a presença de EVs em fluídos biológicos. A caraterização dos EVs de ES-2 sugeriu o enri- quecimento em vias metabólicas envolvidas em processos tumorais. Esta metodologia para carateriza- ção do conteúdo metabólico pode futuramente ser aplicada em EVs de fluídos ascíticos e lavados peri- toneais para elucidar o papel dos EVs como mediadores do crosstalk metabólico no microambiente tumoral e eventualmente revelar potenciais biomarcadores para o prognóstico de cancro do ovário.
O cancro do ovário é a principal causa de morte por doenças ginecológicas em mulheres. Geral- mente o diagnóstico é tardio e acompanhado por ascites, a acumulação de fluído ascítico na cavidade peritoneal associada a processos metastáticos e mau prognóstico. Os fluídos ascíticos são constituídos por componentes pró-tumorigénicos, como vesículas extracelulares (EVs) envolvidas no crosstalk in- tercelular estabelecido em microambientes tumorais. Alterações metabólicas são um marcador de can- cro e estão relacionadas com a sensibilidade ao tratamento. Contudo, o conteúdo metabólico dos EVs é ainda o menos estudado no contexto de cancro do ovário. O objetivo desta tese foi caraterizar o perfil metabólico de EVs isolados de fluídos ascíticos em pacientes de cancro do ovário. Métodos para caraterização de EVs foram primeiro implementados usando EVs de uma linha celular (ES-2), nomeadamente para a deteção de componentes e contaminan- tes de EVs por Western blot e para a análise de metabolómica/lipidómica por LC-MS. Por fim, EVs de fluídos biológicos, incluindo fluídos ascíticos e lavados peritoneais (controlos), foram isolados por cen- trifugação diferencial. Frações isoladas e descartadas foram caraterizadas por Western blot, por micros- copia eletrónica de transmissão (TEM) para análise morfológica das partículas e por nanoparticle tracking analysis (NTA) para determinação da concentração e tamanho, seguindo as diretrizes da Inter- national Society for Extracellular Vesicles. Foi demonstrada a recuperação de EVs no final do isolamento, o aumento de pureza das frações isoladas e a presença de EVs em fluídos biológicos. A caraterização dos EVs de ES-2 sugeriu o enri- quecimento em vias metabólicas envolvidas em processos tumorais. Esta metodologia para carateriza- ção do conteúdo metabólico pode futuramente ser aplicada em EVs de fluídos ascíticos e lavados peri- toneais para elucidar o papel dos EVs como mediadores do crosstalk metabólico no microambiente tumoral e eventualmente revelar potenciais biomarcadores para o prognóstico de cancro do ovário.
Descrição
Palavras-chave
ovarian cancer ascitic fluids metabolic crosstalk extracellular vesicles differential centrifugation metabolomics