A carregar...
Publicação
Desenvolvimento de Novos Biopolímeros Proteicos em Rede
| Nome: | Descrição: | Tamanho: | Formato: | |
|---|---|---|---|---|
| 6.88 MB | Adobe PDF |
Autores
Orientador(es)
Resumo(s)
O presente trabalho teve como objectivos principais a preparação e caracterização de estruturas proteicas supramoleculares artificiais, do tipo rede, a partir da proteína mutante DpsT10C da gaiola proteica Dps de Marinobacter hydrocarbonoclasticus, utilizando reacções de química de clique.
Para tal, testaram-se, primeiramente, as reacções no aminoácido L-cisteína ou em seus derivados, permitindo os resultados obtidos inferir que a metodologia utilizada poderia ser aplicada num sistema mais complexo como o da proteína DpsT10C.
Após expressão e purificação da proteína mutante DpsT10C, esta foi modificada quimicamente com os reagentes alquilantes 3-bromoprop-1-eno, 4-bromobut-1-eno e 3-bromoprop-1-ino nos seus resíduos de L-cisteína, em condições reaccionais suaves. Por fim, acoplaram-se as moléculas de proteína DpsT10C original com as de proteína DpsT10C funcionalizadas, ou com o espaçador 1,2-bis(aliloxi)etano, através dos acoplamentos tiol-eno e tiol-ino, utilizando o fotoiniciador LAP. A formação de estruturas supramoleculares artificiais foi confirmada por electroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes e não desnaturantes e por AFM em meio líquido. As estruturas supramoleculares foram caracterizadas cineticamente e por espectroscopia de CD.
As análises realizadas revelaram que a estrutura secundária das moléculas de proteína nas estruturas formadas não sofreu alteração com a adição das cadeias alquílicas nem com o estabelecimento das ligações cruzadas. Relativamente à morfologia e dimensões das estruturas supramoleculares obtidas, as moléculas de DpsT10C dispõem-se em fibras longas, em alguns casos agrupadas em colónias com aparência semelhante a um coral, que chegam a atingir micrómetros em tamanho. Todas as proteínas funcionalizadas e todas as estruturas supramoleculares analisadas mantiveram a capacidade de ferroxidação e mineralização de ferro, aparentando a estrutura formada com 1,2-bis(aliloxi)etano possuir uma capacidade catalítica mais eficiente ou formar espécies férricas distintas.
Descrição
Palavras-chave
química de clique acoplamento tiol-eno LAP gaiolas proteicas Dps estruturas proteicas supramoleculares artificiais