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Publicação
Aplicação da Técnica de "Nested PCR" Durante o Período Pré-patente para Identificação de Schistosoma mansoni no Hospedeiro Intermediário Biomphalaria glabrata
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Resumo(s)
Biomphalaria glabrata, molusco de água doce, desempenha um importante papel em Parasitologia Médica, por ser o hospedeiro intermediário de Schistosoma mansoni, tremátode digenético responsável pela schistosomose intestinal. A detecção de moluscos infectados pelo Schistosoma mansoni tem uma grande importância em Saúde pública, porque identifica focos de transmissão da schistosomose. As limitações dos métodos clássicos para o diagnóstico de infecções
pré patentes fazem com que os métodos de biologia moleculares sejam vistos como possíveis alternativas através da detecção de ADN do S. mansoni em moluscos hospedeiros. A detecção de sequências específicas de ADN por reacção de polimerase em cadeia (PCR) tem-se verificado ser de extrema importância para a análise genética e diagnóstico de várias doenças infecciosas. Neste estudo foi aplicada a técnica de Nested-PCR, com o objectivo de identificar, no período pré-patente, S. mansoni em moluscos expostos a 1, 5 e 10 miracídios em diferentes períodos de tempo. Foram utilizados moluscos das estirpes albina e selvagem de B. glabrata. Para a realização das técnicas de
PCR e de Nested–PCR (NPCR) foram utilizados dois pares de oligonucleótidos desenhados especificamente para detectar o ADN de S. mansoni . Verificou-se amplificação do fragmento de ADN do parasita em 80% das amostras analisadas, independentemente da dose de miracídios e do período de exposição. O método utilizado é altamente sensível, mostrando ser uma ferramenta útil na detecção de hospedeiros intermediários de S. mansoni, consequentemente na identificação de focos de schistosomose intestinal.
Palavras-chave: Schistosoma mansoni, Biomphalaria glabrata, período pré-patente e Reacção em Cadeia de Polimerase.
Biomphalaria glabrata is a freshwater snail that plays an important role as intermediate host of Schistosoma mansoni, a digenetic trematode responsible for intestinal schistosomiasis. The detection of snails infected by Schistosoma mansoni is of great importance to public health, because it identifies possible focus of transmission of Schistosomose. The limitations of the traditional methods for the diagnosis of pre-patent infections originate that molecular biology methods are seen as possible alternatives to detect DNA of S. mansoni in the host snail. The detection of specific DNA sequences by PCR was confirmed to be of extreme importance for the genetic analysis and the diagnosis of a various infectious diseases. In this study, a Nested-PCR technique was used, with the aim of identifying, pre-patent periods S. mansoni in snails exposed to 1, 5 and 10 miracidia for different periods of time. We used snails strains of albino and wild B. glabrata. For the PCR and Nested- PCR (NPCR) two pairs of oligonucleotides were used, designed specifically to detect the DNA of S. mansoni. There was amplification of the parasite DNA fragment of interest in 80% of the samples, independently of the infecting dose and exposure time. The method proved to be highly sensitive, thus being a useful tool in the detection of intermediate host of S. mansoni, and therefore contributing to the identification of focus of intestinal Schistosomose.
Biomphalaria glabrata is a freshwater snail that plays an important role as intermediate host of Schistosoma mansoni, a digenetic trematode responsible for intestinal schistosomiasis. The detection of snails infected by Schistosoma mansoni is of great importance to public health, because it identifies possible focus of transmission of Schistosomose. The limitations of the traditional methods for the diagnosis of pre-patent infections originate that molecular biology methods are seen as possible alternatives to detect DNA of S. mansoni in the host snail. The detection of specific DNA sequences by PCR was confirmed to be of extreme importance for the genetic analysis and the diagnosis of a various infectious diseases. In this study, a Nested-PCR technique was used, with the aim of identifying, pre-patent periods S. mansoni in snails exposed to 1, 5 and 10 miracidia for different periods of time. We used snails strains of albino and wild B. glabrata. For the PCR and Nested- PCR (NPCR) two pairs of oligonucleotides were used, designed specifically to detect the DNA of S. mansoni. There was amplification of the parasite DNA fragment of interest in 80% of the samples, independently of the infecting dose and exposure time. The method proved to be highly sensitive, thus being a useful tool in the detection of intermediate host of S. mansoni, and therefore contributing to the identification of focus of intestinal Schistosomose.
Descrição
Palavras-chave
Parasitologia médica Schistosoma mansoni Identificação Hospedeiros Biomphalaria glabrata
Contexto Educativo
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Editora
Instituto de Higiene e Medicina Tropical