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Publicação
Implementação e Validação de um Método por UPLC para a Determinação de PAH’s nos Óleos Vegetais e Diagnóstico e Resolução de Problemas Cromatográficos
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Resumo(s)
O presente trabalho teve como objetivos realizar a validação de um método analítico para a determinação de PAH’s nos óleos vegetais, através de cromatografia líquida de ultra-eficiência (UPLC) utilizando o método de padrão interno e diagnosticar e resolver problemas cromatográficos.
Os padrões analisados foram preparados através de diluição de soluções mais concentradas, sendo separados e quantificados através da técnica de cromatografia líquida de ultra-eficiência utilizando uma coluna de fase reversa C18, partículas de 5 μm e dimensões 250x4,6mm, a uma temperatura de 26ºC. Foi utilizado um gradiente isocrático, sendo a fase móvel Acetonitrilo, a um fluxo de 1,5 mL/min.
Estes compostos foram detetados por fluorescência, utilizando três canais (B, C e D) com comprimentos de onda de excitação e emissão fixos em ʎexcitação =270 nm e ʎemissão = 385 nm para o canal B, ʎexcitação =274 nm e ʎemissão = 507 nm para o canal C e ʎexcitação =292 nm e ʎemissão = 410 nm para o canal D.
No que diz respeito à validação do método, foram avaliados os parâmetros: curvas de calibração, linearidade, gama de trabalho e limites de deteção e quantificação. Não foi possível obter a precisão e a exatidão do método, tendo em consideração os problemas que foram surgindo no equipamento.
Os resultados da validação mostram que o método é linear segundo os testes de RIKILT, análise de resíduos, teste das áreas normalizadas e de Mandel, para 7 dos 8 PAH’s nas suas respetivas gamas de trabalho. Os compostos BaA, CHR, BbF, BkF, BaP, Db(a,h)A e I(1,2,3-cd)P são lineares nas gamas 0,2 ppb – 2 ppb, 0,3 ppb – 2 ppb, 0,5 ppb – 10 ppb, 0,1 ppb – 10 ppb, 0,3 ppb – 2 ppb, 0,1 ppb – 2 ppb e 0,9 ppb – 10 ppb, respetivamente. Não foi possível obter a gama do composto B(g,h,i)P.
Com o objetivo de obter resultados viáveis e concluir a validação, foi necessário fazer o diagnóstico e resolução de problemas cromatográficos que foram surgindo. Os principais problemas relacionaram-se com diferenças de pressão no sistema, tempos de retenção incorretos, carryover e falta de precisão. Assim, para chegar à causa raíz dos problemas com resolução menos direta, foi utilizado o diagrama de Ishikawa (Espinha de Peixe ou Causa/Efeito).
Descrição
Palavras-chave
PAH’s SPE UPLC óleos vegetais contaminantes validação