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Publicação
Development and Validation of Methodology for Simultaneous Determination of BAC, Chlorate, DDAC and Histamine in fish by LC-MS/MS
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Orientador(es)
Resumo(s)
Fish is a valuable source of nutrition and in many places, it is a staple food for survival. Histamine is a biogenic amine that, in large quantities, can lead to histamine fish poisoning. In addition, the amino acid that gives rise to histamine is naturally present in fish, which can cause serious problems for consumers as it is a toxic compound. Due to the benefits of fish in the consumer’s diet, they must fulfil food safety requirements so as not to cause harm to the consumer, safeguarding public health.
Thus, the aim of this dissertation is to validate an analytical method for benzalkonium chloride (BACs), chlorate, didecyldimethylammonium chloride (DDACs), and histamine and to develop a method for quantifying histamine, using liquid chromatography combined with mass spectrometer in various species of fish. For BACs and DDACs, the QuEChERS method was used. A different method, QuPPe, was used for chlorate and histamine due to their high polarity.
During method validation, the linearity of the method was assessed in the working range of 0.01 to 0.20 mg/kg. Rikilt’s method proved the linearity of all the pesticides in the working range considered. The limits of quantification obtained are between 0.0008 and 0.0193. The accuracy and precision of the method were also evaluated using recovery and repeatability methods. Some recoveries were found to be outside the 70-120% range in the accuracy analysis. However, in terms of precision, the relative standard deviations were less than 20%. In this case, only european seabass, bigeye tuna and chub mackerel had recovery values outside the range. The robustness test was carried out the Youden’s approximation, where the only significant factor was the mass of the sample. The stability assay at -18ºC proved that the recoveries obtained were within the expected limits and to estimate expanded relative uncertainty, it was found that the maximum value reached is 22.57% for the pesticide DDAC-C-12. The matrix effect in both methods ranged from 2.92 to 468.29% and so the standard addition method had to be applied. The only pesticide that exceeded the limit allowed by regulations was DDAC-C-10.
O peixe é uma fonte nutritiva valiosa e, em muitos locais, é um alimento básico para a sobrevivência. A histamina é uma amina biogénica que, em grandes quantidades, pode levar ao envenenamento do peixe por histamina. Além disso, o aminoácido que dá origem à histamina está naturalmente presente no peixe, o que pode causar graves problemas aos consumidores, uma vez que se trata de um composto tóxico. Devido aos benefícios do peixe na alimentação do consumidor, este deve cumprir os requisitos de segurança alimentar de forma a não causar danos ao consumidor, salvaguardando a saúde pública. Assim, o objetivo desta dissertação consiste na validação de um método analítico para o cloreto de benzalcónio (BACs), clorato, cloreto de didecildimetilamónio (DDACs) e para a histamina e desenvolvimento de um método para quantificação da histamina, utilizando a cromatografia líquida associada à espetroscopia de massa, em várias espécies de peixe. Para os BACs e DDACs, foi utilizado o método QuEChERS. Para o clorato e para a histamina, foi utilizado um método diferente, o QuPPe, devido à elevada polaridade destes compostos. Durante a validação do método, a linearidade deste foi avaliada na gama de trabalho de 0.01 a 0.20 mg/kg. O método de Rikilt provou a linearidade de todos os pesticidas na gama de trabalho considerada. Os limites de quantificação situam-se entre 0.0008 e 0.0193. A exatidão e a precisão do método foram também avaliadas através de métodos de recuperação e de repetibilidade. Verificou-se que algumas recuperações se encontravam fora do intervalo de 70-120%, na análise da exatidão. Contudo, em termos de precisão, os desvios-padrão relativos foram inferiores a 20%. Para este caso, apenas o robalo, o atum patudo e a cavala, obtiveram valores de recuperação fora do intervalo. O ensaio da robustez foi realizado com base na aproximação de Youden, onde o único fator significativo foi a massa da amostra. O teste da estabilidade a -18ºC provou que as recuperações obtidas estavam dentro dos limites esperados e, para estimar a incerteza relativa expandida, verificou-se que o valor máximo que atinge é 22.57% no pesticida DDAC-C-12. O efeito de matriz em ambos os métodos, variou de 2.92 a 468.29%, pelo que teve de ser aplicado o método de adição padrão. O único pesticida que excedeu o limite permitido pelas regulações foi o DDAC-C-10.
O peixe é uma fonte nutritiva valiosa e, em muitos locais, é um alimento básico para a sobrevivência. A histamina é uma amina biogénica que, em grandes quantidades, pode levar ao envenenamento do peixe por histamina. Além disso, o aminoácido que dá origem à histamina está naturalmente presente no peixe, o que pode causar graves problemas aos consumidores, uma vez que se trata de um composto tóxico. Devido aos benefícios do peixe na alimentação do consumidor, este deve cumprir os requisitos de segurança alimentar de forma a não causar danos ao consumidor, salvaguardando a saúde pública. Assim, o objetivo desta dissertação consiste na validação de um método analítico para o cloreto de benzalcónio (BACs), clorato, cloreto de didecildimetilamónio (DDACs) e para a histamina e desenvolvimento de um método para quantificação da histamina, utilizando a cromatografia líquida associada à espetroscopia de massa, em várias espécies de peixe. Para os BACs e DDACs, foi utilizado o método QuEChERS. Para o clorato e para a histamina, foi utilizado um método diferente, o QuPPe, devido à elevada polaridade destes compostos. Durante a validação do método, a linearidade deste foi avaliada na gama de trabalho de 0.01 a 0.20 mg/kg. O método de Rikilt provou a linearidade de todos os pesticidas na gama de trabalho considerada. Os limites de quantificação situam-se entre 0.0008 e 0.0193. A exatidão e a precisão do método foram também avaliadas através de métodos de recuperação e de repetibilidade. Verificou-se que algumas recuperações se encontravam fora do intervalo de 70-120%, na análise da exatidão. Contudo, em termos de precisão, os desvios-padrão relativos foram inferiores a 20%. Para este caso, apenas o robalo, o atum patudo e a cavala, obtiveram valores de recuperação fora do intervalo. O ensaio da robustez foi realizado com base na aproximação de Youden, onde o único fator significativo foi a massa da amostra. O teste da estabilidade a -18ºC provou que as recuperações obtidas estavam dentro dos limites esperados e, para estimar a incerteza relativa expandida, verificou-se que o valor máximo que atinge é 22.57% no pesticida DDAC-C-12. O efeito de matriz em ambos os métodos, variou de 2.92 a 468.29%, pelo que teve de ser aplicado o método de adição padrão. O único pesticida que excedeu o limite permitido pelas regulações foi o DDAC-C-10.
Descrição
Palavras-chave
Fish Histamine Method Development Validation of methodology Pesticides Liquid Chromatography