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Human polyomaviruses in waste and environmental waters in the Lisbon Metropolitan Area

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Resumo(s)

Human polyomaviruses (HPyVs) are commonly associated with asymptomatic infections, albeit some have been linked to diseases in immunocompromised hosts. Moreover, most of these viruses are present in human excreta, being routinely found in wastewater and environmental waters worldwide. Although the human health risk associated with the presence of fecal pollution in environmental waters has traditionally been assessed by the presence of fecal indicator bacteria, recently, HPyVs have been proposed as indicators of human waste contamination. This is mostly due to their host-specificity, non- seasonal distribution, and relatively high titers in untreated sewage, and other aquatic environments. To date, there appears to be no substantial data surrounding the geographic distribution and genetic diversity of HPyVs in Portugal. Therefore, this study aims to address these issues by targeting the HPyVs’ structural protein-coding region, which was partially amplified using two touch-down PCR multiplex protocols. To do so, wastewater influents and environmental water samples were collected between 2018 and 2020 in the Lisbon Metropolitan area, one of the most populated hubs in Portugal. The results disclosed the circulation of HPyV1, HPyV2, HPyV5 and HPyV6 in 35.3 % (n = 6), 29.4 % (n = 5), 47.1 % (n = 8) and 29.4 % (n = 5) of the water samples analyzed, respectively. Genetic characterization revealed the coexistence of various genotypes, with this being particularly true for HPyV2, for which five genotypes were identified (including a putative new genotype 9). The phylogenetic trees obtained for HPyV5 and HPyV6 appeared to be less robust than those of HPyV1/HPyV2, but their genetic diversity was still apparent. These results support the clear usefulness of the molecular analysis of HPyVs in disclosing their epidemiological distribution patterns in the general population. Furthermore, this work demonstrates that studies involving their detection/genetic characterization are key to assess HPyVs’ potential as human fecal markers.
Os poliomavírus humanos (HPyVs) são normalmente associados a infeções assintomáticas, embora alguns sejam agentes etiológicos de patologias que ocorrem em hospedeiros imunocomprometidos. A maioria destes vírus encontra-se em excreções humanas, sendo frequentemente identificados em águas residuais e ambientais. Apesar da poluição fecal (e respetivo risco de saúde pública) em águas ambientais ser tradicionalmente avaliada pela presença de bactérias indicadoras de contaminação fecal, os HPyVs foram recentemente propostos como marcadores de contaminação fecal humana. Tal deve-se à sua especificidade para o hospedeiro humano, distribuição não sazonal e concentrações consideravelmente elevadas em águas residuais e outros ambientes aquáticos. Atualmente, não existem dados claros sobre a distribuição geográfica e diversidade genética dos HPyVs em Portugal. Este estudo teve como objetivo abordar essas questões, através da amplificação de parte da região codificante das proteínas estruturais destes vírus, utilizando dois protocolos de PCR touch-down em multiplex. Amostras de influentes de águas residuais e ambientais foram recolhidas entre 2018 e 2020 na área metropolitana de Lisboa, o centro urbano mais populoso do país. Os resultados revelaram a deteção de HPyV1, HPyV2, HPyV5 e HPyV6 em 35,3% (n = 6), 29,4% (n = 5), 47,1% (n = 8) e 29,4% (n = 5) nas amostras de água analisadas, respetivamente. A sua caracterização genética revelou a coexistência de vários genótipos, especialmente para HPyV2, no qual foram identificados cinco dos genótipos (incluindo um possível novo genótipo 9). As árvores filogenéticas de HPyV5 e HPyV6 apresentaram um menor poder resolutivo do que o registado para HPyV1/HPyV2, mas foi possível constatar a sua diversidade genética. Estes resultados demonstram a utilidade da análise molecular destes vírus no esclarecimento dos seus padrões de distribuição epidemiológica na população. Este trabalho demonstra ainda que estudos que envolvem a deteção/caracterização genética dos HPyVs são fundamentais para avaliar o seu potencial como marcadores de contaminação fecal humana.

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Human polyomavirus Lisbon metropolitan area wastewater influents environmental waters multiplex PCR

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