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Affinity Capture Approaches for AAV Purification
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Resumo(s)
Currently, there has been a period marked by developments in the field of gene therapy, focused on personalized medicine. Therapies based on direct and targeted in vivo delivery of the gene load, such as Glybera, Luxturna or Zolgensma, stand out as the first therapies to be approved.
Diseases such as Leber’s congenital amaurosis or Duchenne muscular dystrophy are some examples of conditions whose treatment involves viral load therapies, with a current demand that can reach values in the order of 1013 to 520 viral genomes, respectively.
The production of these large amounts of vectors exerts considerable pressure on manufacturing processes and, although mechanisms for optimizing cell culture systems are already known, there is still little knowledge in defining strategies concerning the development of downstream processes.
As such, the subject of this thesis, focused on the intensive purification for the AAV production, comparing different alternatives for AAV capture process. The packed bed approach was provided a scalable approach for AAV capture. This process was further improved with a parallel operation of two chromatographic beds that enabled a continuous processing of feed stream. A different approach was followed using magnetic chromatography media. Here we explored the potential of intensifying and integrate the harvest and clarification procedures in the bioreactor.
Atualmente vive-se um período marcado por desenvolvimentos no campo da terapia génica, com foco na medicina personalizada. Terapias baseadas na entrega direta e direcionada in vivo da carga génica, como a Glybera, Luxturna ou Zolgensma, destacam-se como as primeiras a serem aprovadas. Doenças como a amaurose congénita de Leber ou a distrofia muscular de Duchenne são alguns exemplos de condições cujo tratamento envolve terapias de carga viral, com uma demanda que pode atingir valores na ordem de 1013 a 520 genomas virais, respetivamente. A produção dessas grandes quantidades de vetores exerce uma pressão considerável sobre os processos de fabricação e, embora já sejam conhecidos mecanismos de otimização de sistemas de cultura de células, ainda há pouco conhecimento na definição de estratégias para o desenvolvimento de processos a jusante. Como tal, o tema desta tese focou-se na purificação intensiva para a produção de AAVs, comparando níveis a jusante de cromatografia de afinidade, utilizando uma coluna e resina de afinidade com a captura por separação magnética com Magnetic Beads.
Atualmente vive-se um período marcado por desenvolvimentos no campo da terapia génica, com foco na medicina personalizada. Terapias baseadas na entrega direta e direcionada in vivo da carga génica, como a Glybera, Luxturna ou Zolgensma, destacam-se como as primeiras a serem aprovadas. Doenças como a amaurose congénita de Leber ou a distrofia muscular de Duchenne são alguns exemplos de condições cujo tratamento envolve terapias de carga viral, com uma demanda que pode atingir valores na ordem de 1013 a 520 genomas virais, respetivamente. A produção dessas grandes quantidades de vetores exerce uma pressão considerável sobre os processos de fabricação e, embora já sejam conhecidos mecanismos de otimização de sistemas de cultura de células, ainda há pouco conhecimento na definição de estratégias para o desenvolvimento de processos a jusante. Como tal, o tema desta tese focou-se na purificação intensiva para a produção de AAVs, comparando níveis a jusante de cromatografia de afinidade, utilizando uma coluna e resina de afinidade com a captura por separação magnética com Magnetic Beads.
Descrição
Palavras-chave
AAVs Gene Therapy Downstream Affinity Chromatography Magnetic Fishing