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Substrate-binding proteins as amino acid sensors inside Cytolysin A

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Resumo(s)

Amino acids are important biomarkers within the context of several human diseases. However, continuous measurement of their levels is hard due to the high-cost complex machinery involved. Biological nanopores are one of the emerging biosensing alternatives suitable for this purpose. In this thesis, ClyA-AS type I was used along with engineered protein sensors for glutamine, asparagine, leucine, methionine and cysteine. We show that discrimination and quantification of glutamine, leucine and cysteine is possible, and further provide favorable insights for the future use of this biosensing approach with different engineered protein sensors.
Os aminoácidos são biomarcadores importantes no contexto de várias doenças no corpo humano. No entanto, a medição contínua dos seus níveis é difícil devido ao elevado custo e complexidade do equipamento envolvido. Os nanoporos biológicos são uma das alternativas emergentes de biossensores adequadas para este fim. Nesta tese, ClyA-AS do tipo I foi utilizado juntamente com sensores de proteínas modificadas com afinidade para glutamina, asparagina, leucina, metionina e cisteína. numa tentativa de quantificar diferentes concentrações de ligantes. Os resultados obtidos demostraram que é possível discriminar e quantificar glutamina, leucina e cisteína, além de fornecerem perspetivas favoráveis para o uso futuro desta abordagem de biossensores com diferentes sensores de proteínas.

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Palavras-chave

Amino acids Biosensing Nanopores Substrate-binding proteins Dissociation Constant

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