A carregar...
Publicação
Unravelling the function of the Skf system of Staphylococcus aureus
| Nome: | Descrição: | Tamanho: | Formato: | |
|---|---|---|---|---|
| 2.92 MB | Adobe PDF |
Autores
Orientador(es)
Resumo(s)
Staphylococcus aureus colonizes humans asymptomatically but can also be a world-leading
nosocomial opportunistic pathogen, namely methicillin-resistant S. aureus (MRSA), able to also cause
infections in the healthy community. MRSA can acquire and maintain several resistance mechanisms
and presents a high assortment of virulence factors. Since the beginning of utilization of antibiotics, new
antibiotic-resistant bacteria, like MRSA, are continuously emerging. Finding new strategies to fight
antimicrobial-resistant pathogens is a major priority and antimicrobial peptides (AMPs) are receiving
much attention as alternatives to antibiotics. Transcriptome analysis of a S. aureus mutant in an essential
cell wall gene (murF) – that presented a peptidoglycan defect described to be lethal – revealed the
overexpression of two small ORFs encoding for the small proteins SkfA and SkfB. These two ORFs
have unknown function and are exclusive to S. aureus. The results obtained in previous studies indicated
that the SkfA and SkfB proteins may act as AMPs, possibly being excreted to the external environment
by the putative transmembrane transporter, SkfC. The aim of this project consists of deepening the
existing knowledge to functionally characterize the SkfAB system by validating the hypothesis that
SkfA and SkfB are AMPs. To achieve this objective, the activity of SkfA and SkfB in inter-species
interaction was analyzed. Promoter fusion assays showed that the skf promoter is upregulated in inter-
-species interactions, the upregulation being more evident for co-cultures with Gram-negative bacteria.
Assays were also performed to understand how SkfA and SkfB impact interaction with the host.
Macrophage infection assays showed that the SkfA and SkfB proteins enhance macrophage
internalization and survival.
The results of this thesis showed that the Skf proteins are involved in inter-species interactions and
interactions with the host.
Staphylococcus aureus coloniza humanos assintomaticamente, mas consegue ser também um patógeno oportunista nosocomial global, nomeadamente S. aureus resistente à meticilina (SARM), capaz também de causar infeções na comunidade saudável. SARM consegue adquirir e manter mecanismos de resistência, e apresenta uma grande variedade de fatores de virulência. Desde o início da utilização de antibióticos, que se assiste ao surgimento contínuo de novas bactérias resistentes a antibióticos. Descobrir novas estratégias contra patógenos resistentes a antibióticos é uma prioridade e os péptidos antimicrobianos (PAMs) estão a receber muita atenção como abordagens alternativas a antibióticos. A análise transcriptómica de um mutante de S. aureus num gene essencial da parede celular (murF) – que apresentava um defeito descrito como letal – revelou a sobreexpressão de duas pequenas ORFs que codificam para as proteínas SkfA e SkfB. Estas duas ORFs são de função desconhecida e exclusivas de S. aureus. Os resultados obtidos em estudos anteriores indicaram que SkfA e SkfB possam atuar como PAMs, sendo possivelmente excretadas para o exterior pelo seu transportador transmembranar putativo, a SkfC. O objetivo deste projeto consiste em aprofundar o conhecimento existente de maneira a caraterizar funcionalmente o sistema SkfAB, ao validar a hipótese que SkfA e SkfB são PAMs. Para atingir este objetivo, a atividade de SkfA e SkfB em interações inter-espécies foi analisada. Ensaios de fusão de promotores mostraram uma regulação positiva do promotor skf em interações inter-espécies, sendo esta mais evidente quando S. aureus está em co-cultura com bactérias Gram-negativas. Também foi explorado o papel de SkfA e SkfB na interação com o hospedeiro. Ensaios de infeção de macrófagos mostraram que as proteínas SkfA e SkfB potenciam internalização e sobrevivência em macrófagos. Os resultados desta Tese demonstraram que as proteínas Skf estão envolvidas em interações inter-espécies e em interações com o hospedeiro.
Staphylococcus aureus coloniza humanos assintomaticamente, mas consegue ser também um patógeno oportunista nosocomial global, nomeadamente S. aureus resistente à meticilina (SARM), capaz também de causar infeções na comunidade saudável. SARM consegue adquirir e manter mecanismos de resistência, e apresenta uma grande variedade de fatores de virulência. Desde o início da utilização de antibióticos, que se assiste ao surgimento contínuo de novas bactérias resistentes a antibióticos. Descobrir novas estratégias contra patógenos resistentes a antibióticos é uma prioridade e os péptidos antimicrobianos (PAMs) estão a receber muita atenção como abordagens alternativas a antibióticos. A análise transcriptómica de um mutante de S. aureus num gene essencial da parede celular (murF) – que apresentava um defeito descrito como letal – revelou a sobreexpressão de duas pequenas ORFs que codificam para as proteínas SkfA e SkfB. Estas duas ORFs são de função desconhecida e exclusivas de S. aureus. Os resultados obtidos em estudos anteriores indicaram que SkfA e SkfB possam atuar como PAMs, sendo possivelmente excretadas para o exterior pelo seu transportador transmembranar putativo, a SkfC. O objetivo deste projeto consiste em aprofundar o conhecimento existente de maneira a caraterizar funcionalmente o sistema SkfAB, ao validar a hipótese que SkfA e SkfB são PAMs. Para atingir este objetivo, a atividade de SkfA e SkfB em interações inter-espécies foi analisada. Ensaios de fusão de promotores mostraram uma regulação positiva do promotor skf em interações inter-espécies, sendo esta mais evidente quando S. aureus está em co-cultura com bactérias Gram-negativas. Também foi explorado o papel de SkfA e SkfB na interação com o hospedeiro. Ensaios de infeção de macrófagos mostraram que as proteínas SkfA e SkfB potenciam internalização e sobrevivência em macrófagos. Os resultados desta Tese demonstraram que as proteínas Skf estão envolvidas em interações inter-espécies e em interações com o hospedeiro.
Descrição
Palavras-chave
Methicillin-resistant Staphylococcus aureus Antimicrobial Peptides Peptidoglycan Biosynthesis Inter-species Interaction Macrophage Infection.