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Publicação
Expansion of tumor-infiltrating lymphocytes (TIL) and modulation of their cytokine production against tumor-associated antigens
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Tumor-infiltrating lymphocyte (TIL) therapy has shown promise in patients with solid tumors, yet TIL expansion from epithelial cancer remains difficult. In this thesis, we investigated TIL expansion from gastrointestinal (GI, including pancreatic) and breast cancer (BC) tissue to evaluate TIL reactivity against tumor-associated antigens (TAAs). Given the pleiotropic functions of the cytokine IL-6, GI cancer-derived TIL were co-cultured with (patient) cancer-specific and TAAs peptides in the presence of IL-6, IL-6/IL-6R, or hyper-IL-6 (engineered-IL-6 linked to its soluble receptor), and assessed for IFN-ɣ production. IL-6 drives classic STAT3-signaling, whereas IL-6/IL-6R and hyper-IL-6 promote trans-signaling independent of membrane IL-6R. Results demonstrated that hyper-IL-6 significantly enhanced TIL reactivity, but only in the presence of TAAs, suggesting IL-6 signaling effects depend on antigenic context. As Sialyl-Tn (STn) is an aberrant mucin glycosylation, STn-specific reactivity was assessed using STn-decorated mucins. IgG in plasma from patients with cancer shows higher reactivity compared to plasma from healthy donors, although no STn-specific TIL reactivity was detected. As virus-specific bystander T-cells have been reported to be prevalent in tumor tissue and since HPV is implicated in epithelial cancer (cervical, anal and head and neck cancers), TIL from GI and BC (considered HPV unrelated) were tested against HPV16 peptides measuring IFN-ɣ, IL-4, IL-17. While GI cancer tissue lacked HPV DNA, HPV16-specific TIL reactivity was detected in both GI and BC, yet the biological significance is still unclear. Notably, TIL collected after PD-1 blockade plus chemotherapy from patients with BC showed enhanced HPV-reactivity compared to pre-treatment tissue samples, highlighting therapy-induced modulation. Overall, these findings suggest that HPV-reactivity may contribute to local cellular immune responses in TIL from patients with HPV-negative cancer and show that checkpoint inhibitor therapy broadens the immune recognition pattern in tissue-context in patients with BC. Engineered IL-6 variants may aid to increase TIL reactivity to defined target antigens.
Apesar dos resultados promissores da terapia com linfócitos infiltrantes tumorais (TIL), sua expansão continua a ser um desafio técnico. Nesta dissertação, TIL foram expandidos de tecidos de cancros gastrointestinais (GI) e da mama (BC), avaliando a sua reatividade contra antigénios associados ao tumor (TAAs). TIL derivado de tumores GI foram incubados com péptidos representativos de TAAs e de neoantigénios na presença de IL-6, IL-6/IL-6R ou hiper-IL-6 (IL-6 conectado ao seu recetor solúvel) e testados quanto à produção de IFN-ɣ. IL-6 promove sinalização clássica (STAT3), enquanto IL-6/IL-6R e hiper-IL-6 promovem trans-sinalização independente do IL-6R de membrana. Hiper-IL-6 aumentou a reatividade dos TIL contra TAAs, indicando que os efeitos da IL-6 podem depender do contexto antigénico. Como o Sialyl-Tn (STn) é uma glicosilação aberrante em mucinas, avaliou-se a reatividade usando mucinas ricas em STn. IgG no plasma dos pacientes com cancro mostram maior reatividade face a dadores saudáveis, embora não tenha sido detetada reatividade específica de STn nos TIL. Uma vez que linfócitos T com reatividade viral já foram descritos em tecidos tumorais e visto que HPV é associado a cancro epitelial (cancro cervical, anal e cabeça e pescoço), TIL de GI e de BC foram incubados com péptidos de HPV16 (produção de IFN-ɣ, IL-4 e IL-17). Apesar da não deteção de DNA de HPV no tecido tumoral de GI, denotou-se reatividade de TIL HPV16-específica em GI e BC. Observou-se aumento de reatividade dos TIL após o tratamento do paciente com anti-PD-1 e quimioterapia. No geral, estes achados sugerem que reatividade contra HPV poderá contribuir para resposta imune local dos TIL de pacientes com cancro HPV-negativo e mostra que terapia com inibidores de pontos de controle imunológico aumenta o reconhecimento imune em pacientes com BC. Variantes de IL-6 modificadas poderão aumentar reatividades dos TIL contra antigénios específicos.
Apesar dos resultados promissores da terapia com linfócitos infiltrantes tumorais (TIL), sua expansão continua a ser um desafio técnico. Nesta dissertação, TIL foram expandidos de tecidos de cancros gastrointestinais (GI) e da mama (BC), avaliando a sua reatividade contra antigénios associados ao tumor (TAAs). TIL derivado de tumores GI foram incubados com péptidos representativos de TAAs e de neoantigénios na presença de IL-6, IL-6/IL-6R ou hiper-IL-6 (IL-6 conectado ao seu recetor solúvel) e testados quanto à produção de IFN-ɣ. IL-6 promove sinalização clássica (STAT3), enquanto IL-6/IL-6R e hiper-IL-6 promovem trans-sinalização independente do IL-6R de membrana. Hiper-IL-6 aumentou a reatividade dos TIL contra TAAs, indicando que os efeitos da IL-6 podem depender do contexto antigénico. Como o Sialyl-Tn (STn) é uma glicosilação aberrante em mucinas, avaliou-se a reatividade usando mucinas ricas em STn. IgG no plasma dos pacientes com cancro mostram maior reatividade face a dadores saudáveis, embora não tenha sido detetada reatividade específica de STn nos TIL. Uma vez que linfócitos T com reatividade viral já foram descritos em tecidos tumorais e visto que HPV é associado a cancro epitelial (cancro cervical, anal e cabeça e pescoço), TIL de GI e de BC foram incubados com péptidos de HPV16 (produção de IFN-ɣ, IL-4 e IL-17). Apesar da não deteção de DNA de HPV no tecido tumoral de GI, denotou-se reatividade de TIL HPV16-específica em GI e BC. Observou-se aumento de reatividade dos TIL após o tratamento do paciente com anti-PD-1 e quimioterapia. No geral, estes achados sugerem que reatividade contra HPV poderá contribuir para resposta imune local dos TIL de pacientes com cancro HPV-negativo e mostra que terapia com inibidores de pontos de controle imunológico aumenta o reconhecimento imune em pacientes com BC. Variantes de IL-6 modificadas poderão aumentar reatividades dos TIL contra antigénios específicos.
Descrição
Palavras-chave
TIL pancreatic cancer breast cancer IL-6 Human Papillomavirus Sialyl-Tn