A carregar...
Publicação
Caracterização e detecção moleculares de Mycoplasma mycoidessubsp. mycoidessc, agente etiológico da peripneumonia contagiosa bovina
| Nome: | Descrição: | Tamanho: | Formato: | |
|---|---|---|---|---|
| 17.22 MB | Adobe PDF |
Autores
Orientador(es)
Resumo(s)
o trabalho realizado incidiu sobre estudos moleculares de Mycoplasma mycoides
subsp. mycoides SC, agente etiológico da Peripneumonia Contagiosa Bovina (PPCB),
como base para o desenvolvimento de aplicações relacionadas com o diagnóstico desta doença e com a sua patogenicidade.
Devido ao grande impacto sócio-económico, a PPCB é considerada pelo "Office Intemational des Epizooties" uma doença grave pertencente ao grupo A e requerendo,como tal, medidas de controlo internacional especiais e rigorosas. Apesar de nos últimos 1O anos se ter registado na Europa, e particularmente em Portugal, uma redução dos surtos de PPCB, medidas de vigilância apertadas devem ser mantidas de modo a poder considerar-se a doença efectivamente erradicada deste continente. Em contrapartida, em África a PPCB ainda é endémica e continua a alastrar-se. É, portanto, evidente a
necessidade de desenvolver novos e melhorados testes de diagnóstico que permitam a identificação específica e sensível de estirpes de M. mycoides subsp. mycoides SC, de modo a determinar as fontes, reservatórios e vias de infecção e a compreender os mecanismos de patogenicidade.
Neste trabalho, a primeira abordagem do problema consistiu no estudo epidemiológico de surtos de PPCB ocorridos no Norte de Portugal entre 1993 e 1998. Um total de 105 isolados de M. mycoides subsp. mycoides SC foram tipificados com o elemento de inserção IS1296. Foram observados três padrões. O padrão E1, comum à maioria das estirpes e já referido como característico de estirpes europeias (Cheng et ai.,1995), não permitiu a detecção de fontes e vias de infecção. Duas das estirpes analisadas evidenciaram, contudo, dois padrões diferentes, E2 (estirpe B676P/93) e E3(estirpe 6092), o primeiro com uma banda adicional de cerca de 6 kb e o segundo sem uma banda de cerca de 10 kb. Estas bandas parecem corresponder a uma adição e delecção, respectivamente, de uma cópia do elemento IS1296.
Na segunda parte deste estudo, foram desenvolvidos dois métodos baseados em
PCR e dois tipos de immunoblotting para a diferenciação de estirpes africanas e
europeias de M. mycoides subsp. mycoides SC, com o objectivo de poder vir a controlar
a eventual introdução na Europa de estirpes africanas mais virulentas. Utilizando
iniciadores correspondentes a regiões adjacentes a uma cópia do elemento de inserção IS1296, a reacção de PCR amplificou um fragmento de DNA de 9,3 kb nas estirpes
africanas e um fragmento de 450 pb nas europeias, devido à delecção de uma região
genómica de 8,5 kb nestas últimas estirpes (Vilei et ai., 2000). Foram analisadas 98
estirpes, incluindo a estirpe tipo PG1, 84 estirpes europeias, entre as quais 80 isoladas em Portugal, e 14 estirpes africanas. Todas elas apresentaram o fragmento amplificado esperado. A região N-terminal da Iipoproteína Lpp8, codificada pelo gene /ppB
identificado no fragmento de 8,5 kb das estirpes africanas, foi expressa e a proteína de
fusão heteróloga Lpp8-His de 38,2 kDa utilizada para: i) indução de anticorpos policlonais
monospecíficos em coelho, a usar na identificação de estirpes africanas por
immunob/otting, e ii) detecção de focos de PPC8, por immunob/otting com soro de
bovinos infectados com estirpes africanas.
Descrição
Dissertação apresentada para obtenção do Grau de Doutor em Biologia Especialidade
Biologia Molecular pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Ciências e Tecnologia. A presente dissertação foi preparada no Departamento de Bacteriologia do Laboratório Nacional de Investigação Veterinária