Analysis of Trace Elements in Human Soft Tissues from Cancerous Patients Using X Ray Fluorescence

Abstract

Cancer is one of the largest causes of death globally, causing millions of deaths each year. Its better understanding is crucial for the development and improvement of treatments. In recent years, trace elements have been used as biomarkers for carcinogenesis, but the number of studies on this subject is small due to the difficulty in obtaining a statisti- cally meaningful number of samples. The use of formalin fixed paraffin embedded (FFPE) samples, which are widely avail- able in hospitals, is a potential solution to the scarcity of samples, but their analysis is harder due to the presence of the paraffin. In this work, a total of 58 normal-tumor pairs of FFPE samples were analyzed (30 pairs of colon samples and 28 of breast samples) with the goal of developing a method capable of overcoming the difficulties imposed by the paraffin, and producing an accurate comparison between the concentration of trace elements in normal and tumor tissue. The samples were analyzed with the M4 TORNADO μXRF spectrometer. An image processing tool was developed in R to select the best areas on the sample to extract the spectra. The quantitative analyses was done with the Fundamental Parameters Method with the use of two matrices, one for colon (38% H, 11% C, 3% N and 46% O) and one for breast (39% H, 22% C, 2% N and 35% O). The matrix compositions were determined based on the mean Z of the FFPE samples for each organ, obtained through the determi- nation of the Compton-to-Rayleigh ration in the spectra and comparison with a reference curve. The statistical analysis was performed in R. The Shapiro-Wilk test was applied to test the normality of the distributions of each element in each type of tissue. To compare the normal and tumor distributions of each element, two non-parametric tests were used: the Kruskal-Wallis test and the Wilcoxon test. The elements that were found to be potential tumor biomarkers were P and S in colon, and P, S, Ca, Fe and Zn in breast. In colon, significant changes were also found in Fe and Ni, but more research is needed to conclude about their involvement in carcinogenesis.

O cancro é uma das maiores causas de morte globalmente, causando milhões de mortes anualmente. O conhecimento acerca deste grupo de doenças é crucial para o desenvolvi- mento e melhoramento dos tratamentos. Recentemente, os elementos de traço têm sido utilizados como biomarcadores da carcinogénese, mas o número de estudos realizados sobre este assunto é reduzido devido às dificuldades na obtenção de um número significa- tivo de amostras. O uso de amostras fixadas em formol e embebidas em parafina (FFPE), que estão disponíveis em grande número nos hospitais, são uma potencial solução para a escacez de amostras, no entanto a sua análise é de maior dificuldade devido a presença da parafina. Neste trabalho, 58 pares normal-tumor de amostras FFPE foram analisadas (30 pares de cólon e 28 de mama) com o objetivo de desenvolver um método capaz de ultrapassar as dificuldades impostas pela parafina e encontrar diferenças na concentração dos elementos de traço em tecido normal e tumoral. As amostras foram analisadas com o M4 TORNADO μXRF spectrometer. Foi desenvolvida em R uma ferramenta de processamento de imagem para selecionar as melhores áreas da amostra para a extração dos espectros. A análise quantitativa foi realizada com o método dos Parâmetros Fundamentais através do uso de duas matrizes, uma para cólon (38% H, 11% C, 3% N e 46% O), e outra para mama (39% H, 22% C, 2% N e 35% O). As composições das matrizes foram determinadas com base no Z médio das amostras. A análise estatística foi realizada em R. Foi utilizado o teste Shapiro-Wilk para averiguar a normalidade das distribuições de cada elemento em cada tipo de tecido. Para comparar as distribuições de cada elemento em tecido normal e tumoral foram utilizados dois testes não paramétricos: Kruskal-Wallis e Wilcoxon. Os resultados mostram que os elementos com potencial para serem utilizados como biomarcadores são P e S no cólon, e P, S, Ca, Fe e Zn na mama. No cólon,também foram encontradas diferenças significativas entre tecido normal e tumoral nas concentrações dos elementos Fe e Ni, mas é necessária mais pesquisa para se poder tirar conclusões.