Caracterização da resposta de anticorpos de ligação e neutralizantes em indivíduos portugueses infetados por VIH-1, contra a gp 120 de isolados VIH-! circulantes em Angola

Abstract

A infeção pelo Vírus da Imunodeficiência Humana constitui, mesmo após largos anos da sua identificação, uma preocupação a nível global, não sendo, ainda, totalmente conhecido o papel dos anticorpos na infeção por este agente etiológico. Este estudo tem como principal foco a caracterização da resposta de anticorpos de ligação (nNAb) e de neutralização (NAb) em indivíduos portugueses infetados por VIH-1. Foram previamente colhidos os plasmas de 406 doentes em Hospitais de Lisboa sob consentimento informado, tendo o estudo sido aprovado pelas Comissões de Ética do Centro Académico de Medicina de Lisboa/Centro Hospitalar Lisboa Norte (CAML/CHLN) e do Hospital Egas Moniz. Analisou-se, através do método ELISA, a resposta dos anticorpos de ligação contra polipéptidos da região C2V3C3 da gp120 de vários subtipos de HIV-1 (AG, B, C, G e H), bem como contra péptidos de uma região conservada da gp41 (EC26 e 3S). Estudou-se ainda a atividade neutralizante contra pseudovírus tier 1 (pNL4.3) e tier 2 de diferentes subtipos (B, C, AC e BC), recorrendo a células TZM-bl. Das 406 amostras testadas em ELISA, 87.7% reagiu com pelo menos um dos 7 polipéptidos. O polipéptido proveniente do subtipo AG foi o mais antigénico (60.8%), seguido por H (54.9%), B (51.0%), G (50.7%), C (48.5%), 3S (12.8%) e EC26 (11.6%). Observou-se uma correlação entre o número de péptidos reconhecidos e o nível da resposta por parte dos anticorpos de ligação (p=0.003 para amostras s/ART e p<0.0001 para amostras c/ART). O pseudovírus tier 1 pNL4.3 foi neutralizado por 87% das amostras de plasmas de indivíduos c/ART e 77% das amostras de plasmas de indivíduos drug naïve. Dos 39 indivíduos sob terapia antirretroviral testados contra pseudovírus tier 2, 59% foi capaz de neutralizar os 6 pseudovírus, 30.8% neutralizou de 1 a 5 estirpes e 10.3% dos indivíduos não foi capaz de neutralizar nenhuma delas. A potência de neutralização (%) do pNL4.3 foi superior em indivíduos sob terapia antirretroviral (79.4% vs 60.2%). A maior potência de neutralização entre os vírus tier 2 correspondeu à estirpe PCH119 (82%), seguido de PCE0217 (79%), TRO11 e 246F3 (72%), BJOX2000 (69%) e por último PCE1176 (62%). Observou-se uma correlação estatística entre a média da absorvância lida na resposta dos anticorpos de ligação de cada um dos plasmas e a percentagem média de neutralização dos vírus (p=0.047), bem como entre o número de vírus neutralizados e a percentagem média de neutralização (p<0.0001). Em suma, a resposta antigénica eficaz contra a região C2V3C3 proveniente de diferentes subtipos de VIH-1 é acompanhada por elevados níveis de anticorpos neutralizantes em indivíduos infetados com VIH-1 em Portugal, podendo ser um ponto de partida para o desenvolvimento de uma vacina contra este agente patogénico. Palavras-chave: VIH-1; região C2V3C3; glicoproteínas; anticorpos de ligação; ELISA; anticorpos neutralizantes; Neutralização.

Human Immunodeficiency Virus infection constitutes, even after many years of its identification, a concern at a global level, and the role of antibodies in the infection by this etiological agent is not yet fully known. This study has as main focus the characterization of the response of binding antibodies (nNAb) and neutralizing antiboodies (NAb) in portuguese individuals infected by HIV-1. Plasmas of 406 patients were previously collected at the Lisbon Hospitals with informed consent, and the study was approved by the Ethics Committee of the Lisbon Medical Center/Centro Hospitalar Lisboa Norte (CAML/CHLN) and Egas Moniz Hospital. The non-neutralizing antibodies response against gp120 C2V3C3 region polypeptides from many HIV-1 subtypes (AG, B, C, G and H), and against a gp41 conserved region peptides (EC26 and 3S) were analyzed by ELISA. Neutralizing activity against tier 1 virus (pNL4.3) and tier 2 of different subtypes (B, C, AC and BC) was studied using TZM-bl cells. Of the 406 samples tested by ELISA, 87.7% reacted with at least one of the 7 polypeptides. The polypeptide from the AG subtype was the most antigenic (60.8%), followed by H (54.9%), B (51.0%), G (50.7%), C (48.5%), 3S (12.8%) and EC26 (11.6%). There was a correlation between the number of recognized peptides and the response by binding antibodies (p=0.003 for samples without ART and p<0.0001 for samples with ART). The pseudovirus tier 1 pNL4.3 was neutralized by 87% of the plasmas from indiduals with ART and 77% of the plasmas from individuals without ART. Of the 39 individuals under antiretroviral therapy tested against pseudovirus tier 2, 59% were able to neutralize the 6 pseudoviruses, 30.8% neutralized 1 to 5 viruses and 10.3% of individuals were not able to neutralize any virus. The neutralizing potency (%) of pNL4.3 was higher in people receiving antiretroviral therapy (79.4% vs 60.2%). The highest neutralizing potency among the tier 2 viruses was PCH119 (82%), followed by PCE0217 (79%), TRO11 and 246F3 (both with 72%), BJOX2000 (69%) and PCE1176 (62%). A statistical correlation was found between the mean absorbance read on the binding antibody response from each sample and the mean percentage of virus neutralization (p=0.047), as well as between the number of virus recognized and the mean percentage of neutralization (p<0.0001). In conclusion, the effective antigenic response against the C2V3C3 region from different HIV-1 subtypes is accompanied by high levels of neutralizing antibodies in individuals infected with HIV-1 in Portugal, being able to be a starting point for the development of a vaccine against this pathogen. Keywords: HIV-1; C2V3C3 region; glycoproteins; binding antibodies; ELISA; neutralizing antibodies.