O doente drepanocítico: a modulação da resposta imune e a susceptibilidade para a síndrome torácica aguda

Abstract

A Drepanocitose, Doença das Células Falciformes (DCF), é uma hemoglobinopatia caracterizada pela mutação do gene da β hemoglobina, em que a molécula normal hemoglobina (HbA) sofre alteração para a forma de hemoglobina S (HbS). Estes doentes apresentam maior suscetibilidade a infeções, com alterações reportadas na imunidade inata e na imunidade adaptativa. Concretamente encontram-se nestes doentes, deficiências na secreção de IgM, diminuição as células B de memória IgM+, células T CD4 e T CD8, e aumento das células de T CD4 de Memória. Também os níveis séricos de MBL e CD40L se encontram alterados. No doente drepanocítico, a Síndrome Torácica Aguda (STA) é das principais causas de internamento, morbilidade e mortalidade, surgindo por causa infeciosa, mas também na sequência de crises vaso-oclusivas, características destes doentes. Do ponto de vista da terapêutica, a Hidroxiureia é um dos fármacos de eleição. O objetivo deste estudo foi a caracterização do perfil imune da população pediátrica com Drepanocitose do Hospital D. Estefânia – Centro Hospitalar de Lisboa Central (HDE), e a posterior avaliação deste perfil em função da ocorrência de STA e da instituição de Hidroxiureia. Assim, foram recolhidas amostras de sangue de 30 doentes diagnosticadas com Drepanocitose, analisadas no Laboratório de Imunologia da NMS|FCM. Foram avaliadas distintas populações celulares por Citometria de Fluxo, e em particular foi utilizado o tubo PIDOT, do consórcio Euroflow, com a respetiva base de dados. Foram também utilizadas técnicas imunoenzimáticas e imunofluorescentes para o doseamento dos mediadores solúveis MBL e CD40L. Para esta avaliação foram utilizados soros controlo do Laboratório de Imunologia, obtidos a partir de uma população pediátrica saudável acompanhada no HDE. O grupo de doentes foi posteriormente dividido de acordo com a história de STA e com a instituição ou não de Hidroxiureia. Na generalidade dos doentes, as subpopulações celulares apresentaram-se dentro dos valores de referência da Base de Dados EuroFlow, com as alterações observadas em alguns doentes a traduzir o descrito na literatura. Em relação à ocorrência de episódios de STA, apenas a população de células dendríticas plasmacitoides se apresentou diminuída nos doentes com história de STA, o que pode representar um possível elemento a considerar do ponto de vista de marcadores de risco. Em relação à terapêutica com Hidroxiureia, observou-se diminuição de células T CD4+ Memória Central e Efetoras, bem como de Monócitos e Basófilos nos doentes com terapêutica, que também evidenciaram valores mais elevados de células T TCRγδ. Estes elementos, devidamente confirmados poderão vir a ter aplicação futura na monitorização da terapêutica, do ponto de vista da resposta imune. Relativamente à avaliação dos marcadores séricos, observou-se diminuição de MBL e aumento de CD40L nos doentes, ao encontro do que tem sido descrito. Não houve alterações nas comparações de doentes com e sem STA, e com e sem terapêutica. Em conclusão, este estudo pioneiro na aplicação das estratégias EuroFlow ao doente com Drepanocitose, suporta a sua aplicabilidade no acompanhamento destes doentes, nomeadamente na avaliação potenciais fatores de risco para o desenvolvimento de STA e na avaliação da eficácia da terapêutica, a nível da resposta imune.

Sickle Cell Disease (SCD) is an hemoglobinopathy characterized by the mutation of the β-hemoglobin gene, in which the normal hemoglobin (HbA) molecule changes to the hemoglobin S (HbS) form. These patients are more susceptible to infections, with reported changes in innate immunity and adaptive immunity. Specifically, in these patients there are deficiencies in IgM secretion, decrease in IgM+ memory B cells, CD4 and CD8 T cells, and increased Memory CD4 T cells. Also, the serum levels of MBL and CD40L are altered. In patients with sickle cell disease, Acute Chest Syndrome (ACS) is the main cause of hospitalization, morbidity and mortality, arising from infectious causes, but also from vaso-occlusive crises, which are characteristic of these patients. From the therapeutic point of view, Hydroxyurea is one of the drugs of choice. The aim of this study was to characterize the immune profile of the pediatric population with Drepanocytosis of the Hospital D. Estefânia - Centro Hospitalar de Lisboa Central (HDE), and the subsequent evaluation of this profile according to the occurrence of ACS and the use of Hydroxyurea. Blood samples were collected from 30 patients diagnosed with Drepanocytosis and were analyzed at the Immunology Laboratory of NMS | FCM. Distinct cell populations were evaluated by Flow Cytometry, and in particular the PIDOT tube from the EuroFlow consortium was used with its Database. Immunoenzymatic and immunofluorescent techniques were also used for the determination of the soluble mediators MBL and CD40L. For this evaluation control sera from the Immunology Laboratory were used, obtained from a healthy pediatric population followed at HDE. Patients were further divided according to the history of ACS and to the use Hydroxyurea. In most patients, cell subpopulation presented values within the reference values of the EuroFlow Database, with the alterations observed in some cases translating what has been reported in literature. As for the occurrence of ACS, only the population of plasmacytoid dendritic cells was decreased in patients with a history of ACS, which may represent a possible element to be considered as a risk marker for the occurrence of ACS. Regarding the use of Hydroxyurea, decreased Central and Effector Memory CD4+ T, as well as Monocytes and Basophils were observed in patients under therapy, which also presented increased TCRγδ T cells. These elements, properly confirmed, may have future application in monitoring the effect of therapy from the immune point of view. Regarding the evaluation of serum markers, a decrease in MBL serum levels and an increase in CD40L serum levels were observed, in accordance with data from previous reports. In brief, this study, using for the first time the EuroFlow strategies in patients with SCD, supports the application of these platforms in this disease, namely in the evaluation of potential risk markers for the development of ACS, and even in the evaluation of therapeutics efficacy from the immune point of view.