Avaliação de antigénios de Trichiella spiralis no decurso da Triquinelose em modelo murino

Abstract

A triquinelose é uma zoonose, actualmente considerada uma doença emergente e/ou reemergente. Novas fontes de infecção humana resultam do consumo de carne de veado e de cavalo parasitada, apesar da maioria das infecções continuar a ser causada pela carne de porco e de javali. Portugal apresenta um risco potencial, devido ao aumento da criação de porcos em regime extensivo, à confirmação da existência de Trichinella spp. em ciclo silvático e à localização diferentes hospedeiros, parece-nos de elevada importância, uma vez que a sua caracterização poderá contribuir para o desenvolvimento de testes serológicos de maior reprodutibilidade.contígua a Espanha onde a zoonose é endémica. No presente estudo procedeu-se à avaliação imunológica de antigénios produzidos de diferentes fases do ciclo de T. spiralis e à identificação de anticorpos expressos durante o período de infecção em roedores, com o objectivo de contribuir para a melhoria dos métodos serológicos. Das larvas da fase muscular (L1) e de larvas recém eclodidas e/ou em fase de migração (larvas “Newborn” – LNB), produziram-se antigénios somáticos (AgT e AgS, de larvas L1) e antigénios de excreção-secreção (ES), AgESLNB e AgESL1. Os vermes adultos obtidos foram insuficientes para a produção do antigénio. Comparando os resultados obtidos pelo método de ELISA, foi evidente a qualidade superior do antigénio somático L1 (AgT) tanto a nível da sensibilidade como da especificidade e, em particular, na detecção da IgG anti-parasita. Com os outros anticorpos, IgM e IgG1, verificaram-se reacções cruzadas com Toxocara canis com todos os antigénios. Ao comparar-se os níveis dos anticorpos expressos ao longo dos 60 dias de infecção, apenas com os antigénios somáticos (AgT e AgS) se detectou um aumento significativo do título de anticorpos correspondente ao tempo de infecção. No Immunoblotting, o maior número de fracções antigénicas reactivas, com pesos moleculares entre 15 a 250 KD, foi detectado nos antigénios somáticos. As fracções de 49, 68 e 250 KD foram as mais frequentemente reconhecidas (IgG e IgM anti-T. spiralis). O predomínio de certas fracções antigénicas reactivas, de pesos moleculares entre 32-35 KD, 43-45KD, 49 KD e 97- 105 KD, também identificadas no diagnóstico da infecção por outras espécies de Trichinella e em diferentes hospedeiros, parece-nos de elevada importância, uma vez que a sua caracterização poderá contribuir para o desenvolvimento de testes serológicos de maior reprodutibilidade.

Trichinellosis is a parasitic zoonosis transmitted to humans through consumption of raw or undercooked meat (e.g. pork, horse and game meat) containing infective larvae of Trichinella spp. Current evidence suggests that human trichinellosis is emerging/re-emerging in recent years throughout the world. There is a potential risk for trichinellosis transmission in Portugal, mainly due to changes in pig production practices, the presence of sylvatic species of Trichinella and the vicinity of endemic foci in Spain. The aims of the present study were to evaluate the diagnostic performance of four T. spiralis antigenic preparations produced from muscular (L1) and newborn larvae (NBL), obtained from experimental infected Wistar rats. Somatic antigens (AgT and AgS) were prepared from L1 T. spiralis and excretory/secretory (ES) antigens were obtained from both NBL (AgESNBL) and L1 larvae (AgESL1). Antigens from adult worms were not produced due to the insufficient amount of parasites recovered. All antigens (AgT, AgS, AgESNBL and AgESL1), were tested by Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Immunoblotting (IB) for detection of IgG, IgM and IgG1 anti-T. spiralis antibodies during the experimental period (60 days). Increased sensitivity and specificity were achieved with somatic antigens, in particular with AgT/ELISA system for detection of circulating IgG antibodies, while cross reactivity with Toxocara canis were detected with all antigens when tested for IgM and IgG1 isotypes. Moreover, early detection and increasing levels of anti-parasite IgG antibodies with the time of infection were most significant when somatic antigens (AgT and AgS) were used. A panel of protein fractions ranging from 15 to 250 KD were recognized by IgG and IgM antibodies, however only polypetides of 49, 68 and 250 KD were reactive with both antibodies. Some clusters of antigens, in particular those of 32-35 KD, 43-45, 49 KD and 97-105 KD seems to be prominent in other Trichinella species infecting distinct hosts, including humans, as demonstrated by other investigators. Molecular characterization of these polypeptides and the development of new tools, such as recombinant-based protein antigens, could be an important approach to improve reproducible serological tests, which will enable an early and specific diagnosis of trichinellosis caused by Trichinella spp. worldwide.