Contributo para a caracterização molecular de Echinococcus granulosus em Portugal

Abstract

A Equinococose/hidatidose – doença causada pela fase larvar (hidátide – vulgarmente conhecida como quisto hidático) docesto de Echinococcus granulosus – é uma das zoonoses mais comuns e encontra-se entre as de maior importância médica e veterinária. Tem uma ocorrência em ecossistemas variados e a boa adaptação do parasita a diversos hospedeiros contribui para a biodiversidade, com o aparecimento de variações genéticas intraespecíficas ou “estirpes”. De facto, vários estudos demonstraram a existência de dez diferentes estirpes/genótipos (G1 a G10) vindo, assim, confirmar a diferenciação efectuada por critérios morfológicos, biológicos e bioquímicos. A caracterização molecular tem permitido clarificar a epidemiologia e melhorar o controlo desta zoonose, em diferentes países. A maioria das estirpes conhecidas de E. granulosus pode infectar os humanos (principalmente a G1, mas também G2, G5, G6, G7, G8 e G9) com maior ou menor gravidade. O principal objectivo deste estudo é identificar os genótipos de E. granulosus circulantes nos hospedeiros intermediários, em Portugal, dado que não existe ainda nenhum estudo molecular sobre identificação de estirpes deste parasita, em Portugal. As amostras foram isoladas de fígados e pulmões, recolhidos em matadouros, a partir de animais domésticos, como ovinos e bovinos, na região centro de Portugal. Foi feita a extracção de DNA de todas as amostras e, este, foi submetido a técnicas moleculares com base na amplificação da região ITS-1 (ITS1-PCR), Eg9-PCR e Eg16-PCR, às quais foram aplicadas diferentes enzimas tais como a Rsa I, a Cfo I, a Msp I e a Taq I. Para confirmação foi feita, posteriormente, a sequenciação de uma região do genoma mitocondrial que codifica o gene citocromo oxidase c subunidade 1 (COI). Os resultados obtidos mostraram que o genótipo presente nas amostras estudadas (de ovinos e bovinos) é o G1 (estirpe ovina). Devido ao reconhecimento desta estirpe como infecciosa para os humanos, a presença da mesma em Portugal demonstra a importância que a hidatidose pode assumir como problema de saúde pública.

Cystic echinococcosis – caused by the larval stage (hydatic cyst) of the cestode Echinococcus granulosus - is one of the most widespread zoonoses of veterinary and medical importance. Numerous studies have shown that E. granulosus exists as a complex of strains differing in a wide variety of criteria. Ten distinct genotypes (G1-G10) have been identified with impact on pathology, epidemiology and control of cystic hydatic disease. Our main objective was to identify Portuguese genotypes of E. granulosus. In Portugal, no molecular genetic typing study has been carried out to clearly identify the putative strains transmitted. Parasite samples were isolated from liver and lung, in slaughterhouses, from domestic animals such as sheep and cattle, from many regions of Portugal. The samples were submitted to molecular technics using ITS1-PCR, Eg9-PCR, Eg16-PCR and Eg9-PCR linked restriction fragment length polymorphism (RFLP). Some samples were submitted to the sequenciation using primers for COI gene. The only strain identified was G1 (Sheep strain). Since this is the most infectious strain for humans we are in front of public health problem.