Infeção de culturas primárias de monócitos humanos com a bactéria Legionella pneumophila

Abstract

Legionella pneumophila é um bacilo gram-negativo capaz de invadir e de se multiplicar em células eucariotas, incluindo monócitos humanos e células epiteliais. Legionella pneumophila tem a capacidade de manipular os processos celulares sendo este, um dos mecanismos chave que a bactéria utiliza para proliferar dentro do hospedeiro. A infeção por Legionella pode apresentar-se sob duas formas clinicamente distintas, a Doença dos Legionários, causando uma pneumonia grave e a Febre de Pontiac, uma infeção brônquica autolimitada. As fases do ciclo de vida da bactéria e os fatores que promovem a sua replicação dentro da célula fagocítica e a sua transmissão para um novo hospedeiro têm sido objecto de numerosos estudos utilizando diferentes espécies de amibas e linhas contínuas, no entanto, em células monocíticas primárias são poucos os estudos realizados. O principal objectivo deste trabalho foi estudar o processo de replicação da Legionella pneumophila em linhas primárias de monócitos (obtidos partir de sangue periférico doado voluntariamente) e em macrófagos (obtidos por diferenciação de culturas primárias de monócitos humanos). Para se obter uma cultura primária é necessário obter uma grande quantidade de células polimorfonucleares de sangue periférico, sendo que cada isolamento é influenciado pela idade e sexo do dador. Após a infeção das linhas primárias de monócitos e macrófagos com Legionella pneumophila, verificou-se alterações na morfologia das células infetadas. Esta observação foi numa primeira fase corroborada pela quantificação das bactérias às 24h, isto é, a comparação dos valores obtidos no plaqueamento do sobrenadante e do lisado da monocamada apontavam para existência de fagocitose. No entanto, ao comparar o crescimento da bactéria às 24h e 48h depois da infeção, verifica-se que não existiu multiplicação intracelular.

Legionella pneumophila is a gram-negative bacillus that can invade and multiply in eukaryotic cells, including human monocytes and epithelial cells. Legionella pneumophila has the ability to manipulate cellular processes, with this being one of the key mechanisms that the bacteria utilizes to proliferate within the host. Infection by Legionella may present itself clinically in two different ways, Legionnaires' disease, causing severe pneumonia and Pontiac fever, or by a self-limiting bronchial infection. The phases of the bacterial life cycle and the factors that promote replication within the phagocytic cell and its transmission to a new host have been the subject of numerous studies using different species of amoebae and continuous lines, however, there are few studies on primary monocytic. The main objective of this work was to study the process of replication of Legionella pneumophila in primary monocyte lines (obtained from peripheral blood donated voluntarily) and macrophages (obtained by differentiation of primary cultures of human monocytes). To obtain a primary culture it is required to obtain a large amount of peripheral blood polymorphonuclear cells, with each isolation being influenced by the age and gender of the donor. After the infection of primary monocytes and macrophage lines with Legionella pneumophila, changes were observed in the morphology of infected cells. This observation was initially confirmed by the quantification of bacteria at 24h, that is, the comparison of the values obtained in the plating of the supernatant the lysate from the monolayer pointed to phagocytosis. However, comparing the growth of bacteria at 24h and 48h after infection, it appears that there was no intracellular multiplication.