Avaliação do processo de imunização de murganhos vacinados com virus-like particles (VLPs) contendo candidatos antigénicos de Trypanosoma cruzi

Abstract

A doença de Chagas, também denomianada de Tripanossomíase Americana, é uma infeção causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. Foi estimado que 7 milhões de pessoas do mundo estão infetadas com T. cruzi e mais de 25 milhões estão em risco de infeção. Ao longo dos anos têm sido testados vários antigénios com o intuito de produzir vacinas contra a doença de Chagas e até o presente nenhuma destas conseguiu chegar a ensaios clínicos em humanos, embora tenham sido aplicadas várias estratégias imunoterapêuticas para combater a infeção, tais como vacinas de DNA e antigénios recombinantes. A produção de vacinas baseadas nas Virus-like Particles (VLPs) ainda não foi completamente explorada no contexto da doença de Chagas. Neste trabalho pretendeu-se avaliar a resposta imune humoral em murganhos imunizados com VLPs de Triatoma virus (TrV-VLPs) que contêm peptídeos com sequências antigénicas de T. cruzi. Começou-se por caracterizar as propriedades imunoestimuladoras de TrV-VLPs através da otimização do processo de imunização. Por fim, definiu-se a resposta humoral nos murganhos avaliando a produção dos anticorpos anti-TrV-VLPs e anticorpos anti-T. cruzi. Foi selecionado o peptídeo sintético SATA-TLQPVERVL baseado no trabalho realizado por outros investigadores. Neste estudo, o peptídeo foi quimicamente conjugado à superfície das TrV-VLPs por meio dos ligantes com grupos específicos, posteriormente, foi submetido a ensaios de imunização em murganhos. Inicialmente, não foi possível verificar a indução de anticorpos IgG totais anti-peptídeo nos animais imunizados com TrV-VLP conjugado com peptídeo. Posteriormente, alterou-se a estratégia de produção do peptídeo, onde se adicionou uma D-ala para melhorar a sua biodisponibilidade. Com esta nova estratégia foi possível determinar a presença de anticorpos IgG totais anti-SATA-TLQPVERVL-D-ala, bem como as subclasses, IgG1 e IgG2a, nos murganhos imunizados. Em conclusão, os resultados finais sugerem que o peptídeo SATA-TLQPVERVL-D-ala conjugado à superfície da TrV-VLPS poderá ser um importante candidato para o desenvolvimento de potenciais vacinas para a doença de Chagas.

Chagas disease, also known as American trypanosomiasis, is a tropical parasitic disease caused by the protozoan Trypanosoma cruzi. It was estimated that 7 million people are infected with T. cruzi and over 25 million are at risk of infection. Over the years, several antigens have been tested with the goal of vaccine production against Chagas disease, but neither was able to reach human clinical trials. In an effort to revert this situation, various immunotherapeutic strategies were applied to try and oppose the spreading of the infection, namely the DNA vaccines, and recombinant antigens. Production of vaccines based on Virus-like Particles (VLPs) has not yet been explored on the context of Chagas desease. This work proposes to evaluate the humoral immunity on house mice (Mus musculus) immunized with VLPs of Triatoma virus (TrV-VLPs) that contain peptides with antigenic sequences of T. cruzi. The first step was to characterize the immunostimulant properties of TrV-VLPs by optimizing the immunization process. Then, humoral response on house mice was defined evaluating the production of antibodies anti-VLPs and antibodies anti-T. cruzi. The synthetic peptide (SATA-TLQPVERVL), based on work done by others, was selected. In this study, the peptide was chemically conjugated on the surface of TrV’s VLP via ligands with specific groups and posteriorly submitted to trials of immunization in house mice. Initially, it wasn’t possible to verify the production of total IgG antibodies anti-peptide on the animals immunized with TrV’s VLP conjugated with the peptide. Posteriorly, by changing the strategy of peptide production, where D-ala was added to improve its bioavailability. Following this new strategy, it was possible to detect the presence of total IgG antibodies anti-SATA-TLQPVERVL-D-ala with the associated subclasses, IgG1 and IgG2a. In conclusion, final results suggest that this peptide, SATA-TLQPVERVL-D-ala conjugated on the surface of TrV’s VLP might well be is an important candidate to the development of potential vaccines for Chagas desease.