Desenvolvimento de ensaios imunoenzimáticos do tipo ELISA para pesquisa de Legionella pneumophila em suporte de papel utilizando a tecnologia Lab-on-Paper

Abstract

Atualmente, o diagnóstico da Doença dos Legionários é habitualmente efetuado através da pesquisa do antigénio na urina, por imunocromatografia e por ensaios imunoenzimáticos. Dado os gastos crescentes que se verificam na área do diagnóstico laboratorial, existe a necessidade de desenhar testes de baixo custo e fiáveis, que permitam ser uma alternativa às atuais tecnologias de diagnóstico. Neste contexto surgiu o projeto Lab-on-Paper, que visa o desenvolvimento de testes de diagnóstico em papel, descartáveis, baratos, de simples e rápida utilização. Com este trabalho pretende-se desenvolver um teste de diagnóstico rápido (point-of-care) baseado na tecnologia Lab-on-Paper para a deteção de Legionella pneumophila através de um ensaio imunoenzimático (ELISA). O teste baseia-se na impressão de uma microplaca de ELISA em papel, realizando-se em seguida o procedimento idêntico a uma ELISA convencional. Este método não requere equipamento sofisticado, efetuando-se a leitura de forma visual. Nos ensaios realizados, utilizaram-se suspensões de uma estirpe Legionella pneumophila serogrupo 1, adsorvidas nos poços do sensor de papel (filtro e fotocópia), anticorpo policlonal anti-Legionella conjugado com a enzima peroxidase de rábano (HRP) e o substrato ácido etilbenzotialino sulfónico (ABTS). A técnica desenvolvida provou ser exequível para a deteção da bactéria Legionella pneumophila serogrupo 1 utilizando uma ELISA convencional e quando transposta para um sensor de papel de filtro revelou ter uma sensibilidade idêntica (106 UFC/mL). No sensor de papel fotocópia constatou-se uma diminuição da sensibilidade de um log10 (107 UFC/mL). A tecnologia Lab-on-Paper permitiu reduzir os custos diminuindo os volumes de imunoreagentes (para metade), de consumíveis (pontas de micropipetas descartáveis) e os equipamentos utilizados (leitor de microplacas). Esta metodologia pode ser realizada num laboratório com poucos recursos e como permite a substituição da microplaca poliestireno por papel (biodegradável) revela-se amiga do ambiente. Esta alternativa é promissora para o diagnóstico rápido e pretende contribuir para a evolução dos testes point-of-care.