Diversidade genética e parasitária de Galba spp., hospedeiro intermediário de Fasciola hepatica, e outras espécies de limneídeos na margem sul do rio Tejo

Abstract

O parasita zoonótico Fasciola hepatica tem como reservatórios bovinos e ovinos e como hospedeiros intermediários caracóis de água doce da espécie Galba truncatula, principalmente, podendo infetar e usar outras espécies de moluscos como hospedeiros. Foi identificada recentemente a existência de uma espécie gémea, Galba schirazensis, que terá menor capacidade como hospedeiro intermediário, e que foi registada tanto na América do Sul como em Portugal. Num estudo recente na bacia sul do Tejo, detetou-se a presença de G. truncatula, de G. schirazensis e Ampullaceana balthica infetados com F. hepatica em diversos corpos de água, sendo importante a monitorização destas populações e do risco de transmissão. A pesquisa de DNA ambiental tem sido considerada uma ferramenta promissora na avaliação da presença dos hospedeiros intermediários e respetivos tremátodes parasitas. No presente estudo procurou-se contribuir para a prevenção e propagação da fasciolose animal, através da avaliação da pesquisa de DNA ambiental, por PCR e qPCR, e monitorização dos hospedeiros intermediários e parasitas infetantes, em comparação com o estudo anterior na região entre os rios Tejo e Sado, para melhor definir as zonas de risco para a transmissão de F. hepatica, e outros tremátodes com potencial zoonótico. Neste estudo foram encontradas e estudadas populações de limneídeos G. schirazensis e A. balthica, mas não foi confirmada a infeção por tremátodes nestes caracóis. Verificou-se que os primers FheF/ FheR não eram específicos na amplificação da região ITS2 de F. hepatica. Registou-se, ainda, que primers utilizados anteriormente para deteção de G. truncatula, assim como novos primers desenhados para G. schirazensis, não foram suficientemente específicos. Não se detetou DNA ambiental de F. hepatica e seus HI com amostras de campo e de laboratório, nem por PCR nem por qPCR, apesar de testes positivos com material macerado, possivelmente devido a perdas na extração de DNA, ou por não haver DNA suficiente na água coletada. Apesar dos resultados limitados nesta pesquisa de DNA ambiental na avaliação de risco de transmissão de F. hepatica em Portugal, pode-se concluir que a pesquisa de DNA ambiental é promissora, mas que mais estudos com amostras com maior presença de caracóis e melhores métodos de extração e de amplificação de DNA são necessários.

The zoonotic parasite Fasciola hepatica has cattle and sheep as reservoirs and mainly freshwater snails of the species Galba truncatula as intermediate hosts, although it can infect other species of snails. The existence of a twin species, Galba schirazensis, was recently identified, which reportedly has much lower capacity as intermediate host, and which has been recorded in both South America and Portugal. In a recent study in the southern Tagus basin, the presence of G. truncatula, G. schirazensis and Ampullaceana balthica infected with F. hepatica was detected in several bodies of water, making it important to monitor these populations and the risk areas of transmission. Environmental DNA research has been considered a promising tool for evaluating the presence of intermediate hosts and their parasitic trematodes. In the present study, we sought to contribute to the prevention and spread control of transmission animal fasciolosis, through the evaluation of environmental DNA research, by PCR and qPCR, and monitoring of intermediate hosts and infectious parasites, in comparison with the previous study in the region between the rivers Tagus and Sado, to better define transmission risk zones for F. hepatica, and other trematodes with zoonotic potential. In this study, populations of lymnaeids G. schirazensis and A. balthica were found and studied, but trematode infection in these snails was not confirmed. It was found that the FheF/FheR primers were not specific in the amplification of the ITS2 region of F. hepatica. It was also found that primers previously used to detect G. truncatula, as well as new primers designed for G. schirazensis, were not sufficiently specific. No environmental DNA of F. hepatica or its HI was detected with field and laboratory samples, neither by PCR nor by qPCR, despite positive tests with macerated material, possibly due to losses in DNA extraction, or because not enough DNA was present in the collected water. Despite the limited results in this environmental DNA research in assessing the risk of transmission of F. hepatica in Portugal, it can be concluded that environmental DNA research is promising, but that further studies with samples with a greater presence of snails and better methods of DNA extraction and amplification are required.