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Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10362/5926

Título: Au-nanossondas aplicação na detecção de Mycobacterium tuberculosis e plasmodium berghei
Autor: Veigas, Bruno Miguel Ribeiro
Orientador: Baptista, Pedro
Issue Date: 2009
Editora: Faculdade de Ciências e Tecnologia
Resumo: A presente tese apresenta a caracterização de um sistema de Nanossondas de Ouro quanto à sua estabilidade, sensibilidade e especificidade, na detecção de alvos de DNA em amostras controlo e biológicas. Foram analisados factores envolvidos na modelação das propriedades deste sistema, nomeadamente a extensão de funcionalização, o tamanho da sequência dos oligonucleótidos sonda, entre outros. Foram desenvolvidas duas sondas: PlasmBerg e MTub, específicas para Plasmodium berghei e Mycobacterium tuberculosis,respectivamente. O sistema obtido permite a quantificação semi-quantitativa de DNA,com limites de detecção de 13 μg/mL e de 20 μg/mL para as sondas PlasmBerg e MTub respectivamente. Este sistema demonstrou um elevado nível de especificidade,possibilitando a diferenciação entre alvos totalmente complementares de alvos com mismatch. Optimizou-se o sistema de Au-nanossondas para a detecção de mutações pontuais presentes nos codões 516 e 531 do gene rpoB de M. tuberculosis, associados à resistência a antibióticos. Verificou-se que o sistema discrimina entre sequências complementares e sequências com mutações pontuais, possibilitando também a discriminação entre M. tuberculosis e M. kansasii. Validou-se o sistema desenvolvido com a sonda MTub recorrendo a 144 amostras biológicas previamente analisadas por quatro métodos padrão. Verificou-se que apenas 1,2% (1/83) dos resultados Negativo não apresentam qualquer correlação com os testes padrão.
Descrição: Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para a obtenção do grau de Mestre em Biotecnologia
URI: http://hdl.handle.net/10362/5926
Appears in Collections:FCT: DCV - Dissertações de Mestrado

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