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Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10362/4779

Título: Caracterização e detecção moleculares de Mycoplasma mycoidessubsp. mycoidessc, agente etiológico da peripneumonia contagiosa bovina
Autor: Botelho, Ana Rosa Pombo
Orientador: Pinto-Lopes, J.
Issue Date: 2001
Editora: Faculdade de Ciências e Tecnologia
Resumo: o trabalho realizado incidiu sobre estudos moleculares de Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC, agente etiológico da Peripneumonia Contagiosa Bovina (PPCB), como base para o desenvolvimento de aplicações relacionadas com o diagnóstico desta doença e com a sua patogenicidade. Devido ao grande impacto sócio-económico, a PPCB é considerada pelo "Office Intemational des Epizooties" uma doença grave pertencente ao grupo A e requerendo,como tal, medidas de controlo internacional especiais e rigorosas. Apesar de nos últimos 1O anos se ter registado na Europa, e particularmente em Portugal, uma redução dos surtos de PPCB, medidas de vigilância apertadas devem ser mantidas de modo a poder considerar-se a doença efectivamente erradicada deste continente. Em contrapartida, em África a PPCB ainda é endémica e continua a alastrar-se. É, portanto, evidente a necessidade de desenvolver novos e melhorados testes de diagnóstico que permitam a identificação específica e sensível de estirpes de M. mycoides subsp. mycoides SC, de modo a determinar as fontes, reservatórios e vias de infecção e a compreender os mecanismos de patogenicidade. Neste trabalho, a primeira abordagem do problema consistiu no estudo epidemiológico de surtos de PPCB ocorridos no Norte de Portugal entre 1993 e 1998. Um total de 105 isolados de M. mycoides subsp. mycoides SC foram tipificados com o elemento de inserção IS1296. Foram observados três padrões. O padrão E1, comum à maioria das estirpes e já referido como característico de estirpes europeias (Cheng et ai.,1995), não permitiu a detecção de fontes e vias de infecção. Duas das estirpes analisadas evidenciaram, contudo, dois padrões diferentes, E2 (estirpe B676P/93) e E3(estirpe 6092), o primeiro com uma banda adicional de cerca de 6 kb e o segundo sem uma banda de cerca de 10 kb. Estas bandas parecem corresponder a uma adição e delecção, respectivamente, de uma cópia do elemento IS1296. Na segunda parte deste estudo, foram desenvolvidos dois métodos baseados em PCR e dois tipos de immunoblotting para a diferenciação de estirpes africanas e europeias de M. mycoides subsp. mycoides SC, com o objectivo de poder vir a controlar a eventual introdução na Europa de estirpes africanas mais virulentas. Utilizando iniciadores correspondentes a regiões adjacentes a uma cópia do elemento de inserção IS1296, a reacção de PCR amplificou um fragmento de DNA de 9,3 kb nas estirpes africanas e um fragmento de 450 pb nas europeias, devido à delecção de uma região genómica de 8,5 kb nestas últimas estirpes (Vilei et ai., 2000). Foram analisadas 98 estirpes, incluindo a estirpe tipo PG1, 84 estirpes europeias, entre as quais 80 isoladas em Portugal, e 14 estirpes africanas. Todas elas apresentaram o fragmento amplificado esperado. A região N-terminal da Iipoproteína Lpp8, codificada pelo gene /ppB identificado no fragmento de 8,5 kb das estirpes africanas, foi expressa e a proteína de fusão heteróloga Lpp8-His de 38,2 kDa utilizada para: i) indução de anticorpos policlonais monospecíficos em coelho, a usar na identificação de estirpes africanas por immunob/otting, e ii) detecção de focos de PPC8, por immunob/otting com soro de bovinos infectados com estirpes africanas.
Descrição: Dissertação apresentada para obtenção do Grau de Doutor em Biologia Especialidade Biologia Molecular pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Ciências e Tecnologia. A presente dissertação foi preparada no Departamento de Bacteriologia do Laboratório Nacional de Investigação Veterinária
URI: http://hdl.handle.net/10362/4779
Appears in Collections:FCT: DCV - Teses de Doutoramento

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