Caracterização de Cutinase imobilizada em matriz de sol-gel

Abstract

Neste trabalho procedeu-se a alterações na sequência de aminoácidos da cutinase. Obtiveramse os mutantes E.Coli (células WK6) L189W e E.Coli N84W-L182C. Efectuaram-se crescimentos celulares, tendo-se obtido: Tabela 1 – Massa total de cutinase obtida nas produções e respectiva pureza. N84W-L182C L189W Massa total (mg) 211 44 Pureza (%) ~60 ~55 Realizou-se ainda a caracterização de cutinase imobilizada em sol-gel de composição TMOS/MTMS, TMOS/ETMS, TMOS/PTMS e TMOS/BTMS, recorrendo às técnicas de espectroscopia de fluorescência e anisotropia. A adição de um grupo cisteína na posição 182 ao mutante N84W (mutante N84W-L182C) aproximou a resposta de intensidade de fluorescência e λmax à cutinase nativa. O mutante L189W mostrou-se semelhante à cutinase nativa. A análise da anisotropia foi inconclusiva, devido a desnaturação da cutinase (mutante e nativa). Os dados experimentais recolhidos não foram suficientes para esclarecer na totalidade as interacções entre cutinase e matriz de sol-gel.