DSpace UNL

RUN >
Faculdade de Ciências e Tecnologia (FCT) >
FCT Departamentos >
FCT: Departamento de Química >
FCT: DQ - Dissertações de Mestrado >

Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10362/2392

Title: Desenvolvimento de um método de análise quantitativa de concentração celular e PHB por microscopia de fluorescência e análise de imagem
Authors: Alves, Marco António Ricardo
Advisor: Eusébio, Mário
Issue Date: 2009
Publisher: FCT - UNL
Abstract: O objectivo principal deste trabalho é o desenvolvimento de uma técnica de análise de imagem que permita a determinação da concentração celular e da concentração de PHB em amostras retiradas de fermentações experimentais para produção de PHB com culturas puras de E.coli recombinante. Foram estudados vários métodos de conservação das células e, também, a sua influência na qualidade das imagens obtidas. O método de conservação que apresentou melhores resultados foi a fixação das amostras com 5% final de formaldeído. Determinou-se ainda que uma concentração de DAPI de 10 μg/ml era adequada para obter imagens com boa qualidade e desenvolveu-se com sucesso um método de double-staining com DAPI e Azul de Nilo para determinar a concentração de biopolímero através de análise de imagem sem ser necessário recorrer a pares de amostras. Foi desenvolvido um método de análise de imagem baseado na aplicação CellC, escrita em linguagem MatLab, para determinar a concentração celular e a concentração volumétrica de biopolímero através de análise de imagem, sendo monitorizadas cinco fermentações para desenvolver e testar o método. Determinou-se ainda que não existe uma relação linear entre o número de diluições prévias a fazer às amostras, de forma a obter um número razoável de células por campo, e os valores de densidade óptica a 600nm e de peso seco, sendo que, no entanto, para determinadas gamas destes valores se observou uma relação logarítmica. A relação observada foi utilizada em experiências posteriores e permitiu uma diluição adequada das amostras. Verificou-se que para a determinação da concentração celular através de análise de imagem, a evolução da concentração celular ao longo do tempo foi semelhante aos resultados obtidos através de medidas de densidade óptica a 600nm e pesos secos. Os resultados obtidos para a concentração de PHB após análise de imagem comportaram-se de forma semelhante aos obtidos através de cromatografia gasosa, demonstrando que o método desenvolvido pode ser utilizado para quantificação volumétrica do biopolímero. Em suma, neste trabalho desenvolveu-se com sucesso uma técnica de análise de imagem que permite determinar as concentrações celular e volumétrica de biopolímero, tendo em vista os propósitos inicialmente estabelecidos.
Description: Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do grau de Mestre em Engenharia Química e Bioquímica
URI: http://hdl.handle.net/10362/2392
Appears in Collections:FCT: DQ - Dissertações de Mestrado

Files in This Item:

File Description SizeFormat
Alves_2009.pdf2.18 MBAdobe PDFView/Open
Statistics
View Statistics
FacebookTwitterDeliciousLinkedInDiggGoogle BookmarksMySpaceOrkut
Formato BibTex mendeley Endnote Logotipo do DeGóis 

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.

 

Universidade Nova de Lisboa  - Statistics  - Feedback
Estamos no RCAAP Governo Português separator Ministério da Educação e Ciência   Fundação para a Ciência e a Tecnologia

Financiado por:

POS_C UE