Avaliação do desenvolvimento de neurónios em materiais nanoestruturados destinados a uma conduta neural

Abstract

Para promover a regeneração da espinal medula lesada, a Engenharia de Tecidos propõe a utilização de condutas neurais. Estas devem estimular o crescimento orientado de axónios e poderão também servir de suporte para o transplante de células e como veículo para a entrega de moléculas bioativas. Na perspetiva de poderem vir a integrar uma conduta neural, foram produzidas matrizes de fibras submicrométricas pela técnica de electrofiação. Para a sua produção foram usados diversos materiais: gelatina de diferentes origens (de porco, de bovino e de peixe) e quitosano (ambos polímeros de origem natural) e policaprolactona (polímero de origem sintética). Estas matrizes foram produzidas com dois tipos de topografias - fibras depositadas sem orientação preferencial (desalinhadas) e paralelamente alinhadas (fibras alinhadas). Após o processo produtivo, as matrizes de gelatina foram sujeitas a dois tipos de proces-sos de reticulação: um físico (tratamento desidrotérmico-DHT) e outro químico (exposição a vapores de glutaraldeído-GTA). A eficiência destes processos foi analisada por testes de perda de massa das matrizes por imersão em água e ensaios de ninidrina. Os diferentes tipos de matrizes foram avaliados no que diz respeito às suas propriedades mecânicas, através dos ensaios de tração, e quanto à composição química, pela análise de espec-troscopia de infravermelho de transformada de Fourier (FTIR). De forma a avaliar respostas celulares às matrizes produzidas, realizaram-se testes in vitro com duas linhas de células humanas: HFFF2 (fibroblastos) e SH-SY5Y (células prove-nientes de um neuroblastoma). Nos testes com os fibroblastos foram avaliadas taxas de adesão e proliferação celulares nas diferentes matrizes. Estes testes revelaram efeitos citotóxicos associa-dos às gelatinas quando reticuladas por GTA e, uma fraca adesão ao quitosano. Foram estabelecidos protocolos de diferenciação da linha celular SH-SY5Y, com o intui-to de avaliar o desenvolvimento morfológico (extensão do prolongamentos) das células diferen-ciadas semeadas em diferentes substratos. Nesta fase foi possível visualizar o desenvolvimento dos prolongamentos na direção do alinhamento das fibras, comprovando que a topografia auxi-lia a regeneração axonal guiada.