http://hdl.handle.net/10362/423 DCV 2013-06-19T17:31:06Z http://hdl.handle.net/10362/9710 Title: Ocorrência, diagnóstico molecular e resistência a antifúngicos de Candida sp. de infecções vaginais em Portugal e Cabo-Verde Authors: Silva, Zita Dinis Lopes da Abstract: As leveduras Candida sp. encontram-se entre os principais agentes patogénicos causadores de infecções fúngicas vaginais, sendo Candida albicans a espécie mais frequente. Contudo, a realidade em África quanto à sua prevalência como agentes infecciosos é praticamente desconhecida, incluindo em Cabo-Verde onde é totalmente incógnita. Neste trabalho foram estudados 142 isolados clínicos de duas proveniências: Portugal e Cabo-Verde. C. albicans foi a espécie mais prevalente (85% e 69%, respectivamente), estando Candida glabrata em segundo lugar entre os isolados de Portugal (8%) e Candida parapsilosis entre os isolados de Cabo-Verde (19%). Verificou-se a importância da utilização dos métodos moleculares (PCR multiplex e PCR-RFLP) que demonstraram ser simples, mais rápidos e eficazes, possíveis de ser aplicados em rotina nos laboratórios de microbiologia, nomeadamente laboratórios hospitalares por actualmente já não serem muito dispendiosos. A pesquisa da nova espécie C. africana entre os isolados clínicos de Cabo-Verde, mostrou a presença de quatro isolados desta espécie. Apesar de neste trabalho se ter verificado uma elevada sensibilidade dos isolados clínicos dos dois países ao fluconazol e ao voriconazol, nestes últimos anos tem-se verificado um aumento de resistência das espécies de Candida aos antifúngicos azólicos, envolvendo a acção do gene ERG11. Procurou-se, deste modo, pesquisar a existência de mutações ao nível deste gene, bem como procurar alternativas aos antifúngicos convencionais pesquisando novas opções de actividades antifúngicas a partir de plantas medicinais. A análise feita às sequências do gene ERG11 envolvido na resistência aos fármacos demonstrou existirem diferenças entre os isolados sensíveis e os resistentes aos azóis fluconazol e voriconazol. Foram ainda testados óleos essenciais, onde os de Lavandula latifolia,Melaleuca alternifolia, Rosmarinus officinalis apresentaram acção antifúngica. Com este trabalho foi, por fim, possível conhecer parte da realidade cabo-verdiana quanto à prevalência de leveduras Candida sp. como agentes de vulvovaginite. Description: Dissertação para a obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina 2013-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10362/9682 Title: Signal transduction pathways involving the hypertension-related WNK1 and WNK4 protein kinases Authors: Mendes, Ana Isabel Vieira Lopes Abstract: The genes WNK1 and WNK4 belong to the subfamily of WNK protein kinases and their mutation causes pseudohypoaldosteronism type II, a rare familial form of hypertension with hyperkalemia and hypercalciuria. The molecular mechanisms underlying this condition involve the regulation of renal electrolyte homeostasis and the modulation of diverse ion channels and transporters via WNK kinases. Additionally, WNKs have also been reported to participate in signal transduction pathways related to cell survival and proliferation. The objective of the present thesis was to identify novel WNK1 and WNK4 interacting proteins and the underlying signal transduction pathways. First, it was found that WNK1 forms a protein complex with the Rab-GAP TBC1D4 and phosphorylates it in vitro. It was shown that the expression levels of WNK1 regulate surface expression of the constitutive glucose transporter GLUT1 in HEK293 cells. WNK1 is shown to increase the binding of TBC1D4 to regulatory 14-3-3 proteins while reducing its interaction with the exocytic small GTPase Rab8A. Moreover, these effects were kinase activity-dependent. Together, the data describe a pathway regulating constitutive glucose uptake via GLUT1, the expression level of which is related to several human diseases. Second, WNK4 was found to promote the cell surface expression of the CFTR chloride channel in mammalian cells. The mechanism by which WNK4 acts on CFTR involves interaction with the tyrosine kinase Syk, which we found to phosphorylate tyrosine 512 (Tyr512) in the first nucleotide-binding domain of CFTR. The presence of WNK4 prevents this in vitro phosphorylation in a kinase-independent manner. In BHK21 cells stably expressing CFTR, Syk reduces, while WNK4 promotes, the cell surface expression of CFTR. Mutation of Tyr512 revealed that its phosphorylation is a novel signal regulating the prevalence of CFTR at the cell surface and that WNK4 and Syk play an antagonistic role in this process. Finally, ten WNK4 variants were detected in a cohort of Portuguese patients and control individuals, which subsequently were tested for association to hypertension and/or osteoporosis. Despite none of the variants yield any significant association to hypertension, a rare missense alteration (rs56116165) in a highly conserved arginine residue showed a nominal association to osteoporosis. This finding advocates that this polymorphism is a rare allelic variant, in a candidate gene with a biological function in renal calcium homeostasis, that may contribute to a genetic predisposition to osteoporosis. Description: Dissertação apresentada para obtenção do Grau de Doutor em Biologia, na especialidade de Genética Molecular, pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Ciências e Tecnologia 2011-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10362/9655 Title: Distribuição de macroalgas nativas e exóticas no substrato duro subtidal do porto de Sines Authors: Celestino, Susana de Fátima Preciso Abstract: Tendo em conta o potencial impacte de espécies introduzidas em ambientes marinhos, observações de algas exóticas realizadas em estudos anteriores sobre o substrato duro subtidal do Porto de Sines e o facto de este porto ter um intenso tráfego marítimo que inclui navios e outras embarcações provenientes de diversas regiões longínquas, foi estudada a abundância e distribuição de macroalgas exóticas em substratos duros subtidais do porto de Sines, dando especial atenção à macroalga exótica Asparagopsis taxiformis e incluindo o estudo da distribuição de macroalgas nativas. A amostragem deste estudo foi realizada em mergulho com escafandro autónomo e decorreu no Verão de 2004. Com o objectivo de estudar a abundância e a distribuição espacial de A. taxiformis, foi feita uma procura exaustiva desta espécie a uma profundidade de 3 a 10 m em 9 áreas dentro do porto de Sines. Esta espécie foi encontrada com maior abundância no porto de recreio, onde foi estimada quantitativamente a sua percentagem de cobertura, sem recurso a amostragem destrutiva. Com vista ao estudo da distribuição espacial de algas exóticas e nativas no porto de Sines, foram amostradas 6 áreas a uma profundidade de 3 a 6 m. Em cada área, foi amostrada destrutivamente a cobertura de macroepibentos. A alga exótica Asparagopsis taxiformis apenas foi encontrada em duas das nove áreas amostradas. Foi no porto de Recreio que a sua abundância foi mais elevada atingindo, no máximo, 24% de cobertura. No estudo da distribuição espacial de macroalgas exóticas e nativas, foram encontradas três espécies exóticas: Antithamnionella ternifolia, Colpomenia peregrina e Falkenbergia rufolanosa. Neste estudo, as análises multivariadas da estrutura de comunidades de macroalgas revelaram diferenças significativas entre as áreas. Excepto no caso da alga C. peregrina, em que atividades de aquacultura terão sido as principais responsáveis pela sua introdução na costa portuguesa, os vectores de introdução de A. ternifolia, A. taxiformis e F. rufolanosa nesta costa deverão estar relacionados com a utilização de navios e outras embarcações. Description: Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Ecologia, gestão e modelação de recursos marinhos 2013-01-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10362/9424 Title: Molecular mechanisms of sexual development in basidiomycetes: exploring connections with lifestyles Authors: Coelho, Marco António Dias Abstract: This work concerns the investigation of the molecular mechanisms of sexual reproduction in fungi and their possible implication for fungal lifestyles (parasitic vs. saprobic) and for the emergence of asexual fungal lineages. The association between pathogenicity and sexuality is well-known in the basidiomycete plant parasite Ustilago maydis (subphylum Ustilaginomycotina), an economically important smut fungus. However, Ustilago species are phylogenetically interspersed with species of the genus Pseudozyma, which are considered saprobic and asexual. In this work, a study focused on genes involved in determining sexual identity (mating type or MAT genes), showed that Pseudozyma prolifica retains full sexual competence and pathogenicity, being therefore indistinguishable from U. maydis. For other Pseudozyma species, molecular analyses of PRF1, a gene that encodes a master regulator of sexual reproduction in U. maydis, showed no substantial evidence of loss of sexual reproduction. However, some clues were also found suggesting that some Pseudozyma species may be evolving towards a saprobic lifestyle. The earliest derived lineage of Basidiomycota (subphylum Pucciniomycotina) includes also important plant pathogens (rust and anther smut fungi) as well as lineages composed solely of saprobic organisms. Among the latter, the red yeasts of the order Sporidiobolales have the advantage of completing their life cycle in culture media, but have remained very little explored concerning the characterization of mating systems, the identification of MAT genes and the evolutionary relationships between sexual and asexual species. A comprehensive analysis of more than 200 strains belonging to 32 species of the Sporidiobolales indicated that asexuality seems to originate frequently from sexual lineages, but does not seem to persist long enough to form truly asexual species devoid of MAT genes. A more in-depth investigation of the red yeasts Rhodosporidium toruloides and Sporidiobolus salmonicolor allowed the identification for the first time in the Pucciniomycotina of the complete set of MAT genes. A detailed and multidisciplinary characterization of the mating system in the latter species yielded surprising results. A novel mating system that differs substantially from the two mating paradigms in basidiomycetes, the bipolar and tetrapolar systems, was brought to light. Given the basal phylogenetic position of the Pucciniomycotina within the Basidiomycota, this new system designated pseudo-bipolar, constitutes a significant contribution to the study of the evolution of MAT systems in fungi. Description: Dissertação para obtenção do Grau de Doutor em Biologia 2011-01-01T00:00:00Z